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免疫組化的發(fā)展路程?在臨床病理診斷中,免疫組織化學(xué)(IHC)是一種很重要的技術(shù)和手段,從20世紀(jì)70年代開始,免疫組化技術(shù)就應(yīng)用于病理診斷,對(duì)于診斷cancer、cancer分類、判斷預(yù)后產(chǎn)生了巨大的影響,同時(shí)也擴(kuò)展了人們對(duì)于各種疾病及cancer形成過程的認(rèn)識(shí),提高了病理診斷與研究水平。但是,隨著免疫組化的廣泛應(yīng)用,發(fā)現(xiàn)免疫組化技術(shù)存在一些局限性。深入研究免疫組化原理和技術(shù),必須熟悉各種抗體真陽性反應(yīng)部位,實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室間免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化,使免疫組化在病理診斷中發(fā)揮比較大的輔助作用。如果您有免疫組化相關(guān)的實(shí)驗(yàn),可以與我們英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系。英瀚斯生物免疫組化,高效高質(zhì)量出結(jié)果。江西免疫組化外包
免疫組化(IHC)利用抗體檢測(cè)組織切片中蛋白質(zhì)和其他抗原的定位。
英瀚斯生物實(shí)驗(yàn)外包,自有專業(yè)病理實(shí)驗(yàn)室,可高效完成免疫組化檢測(cè)。
抗體-抗原的相互作用通過有色酶底物顯色檢測(cè)或熒光染料熒光檢測(cè)進(jìn)行觀察。雖然IHC在定量方面不如蛋白質(zhì)印跡或ELISA,但是IHC可以提供完整組織中蛋白定位的寶貴信息。蛋白表達(dá)譜對(duì)病理學(xué)家以及作為診斷工具都具有重要意義。
IHC實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于穩(wěn)定、優(yōu)化且可重復(fù)的染色方案,而該方案應(yīng)使用高質(zhì)量的特異性試劑。 江西免疫組化外包做免疫組化的目的是什么?
免疫組化實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)總結(jié):
?本實(shí)驗(yàn)室所用切片一般是石蠟切片。
?烘片:使蠟片水分蒸發(fā),石蠟軟化,組織切片牢固貼在玻片上;烘片至跟烘片前透明度有差異。
?抗原修復(fù)時(shí),使片子始終浸沒在修復(fù)液中,液體不能干。
?一抗孵育在37度培養(yǎng)箱,濕盒放置1h,省時(shí)間和結(jié)合效果好,不要超過1h,容易過染。
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?二抗使用:兩個(gè)二抗放大信號(hào)或一個(gè)二抗;若抗體信號(hào)強(qiáng),可不用放大信號(hào),盡量增大信噪比。
?10XDAB在常溫溶解,盡可能現(xiàn)用現(xiàn)配,放于4度儲(chǔ)存時(shí)間久了效果不佳。
?復(fù)水和脫水時(shí)所用的梯度酒精不可混用,要區(qū)分開。
?加抗體和顯色液時(shí),都要將片子甩干,在半干半濕的狀態(tài)下再加,不然容易造成溶液的二次稀釋。
?整個(gè)操作過程中在顯色之前,一定不能干片。
免疫組化的未來發(fā)展方向隨著技術(shù)的進(jìn)步,免疫組化在未來將朝著更高靈敏度、更高通量和更自動(dòng)化的方向發(fā)展。高靈敏度技術(shù)(如信號(hào)放大系統(tǒng))將能夠檢測(cè)更低豐度的目標(biāo)蛋白。高通量技術(shù)(如組織芯片)將能夠同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣本或多個(gè)目標(biāo)蛋白。自動(dòng)化技術(shù)(如自動(dòng)染色儀)將能夠提高實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化和重復(fù)性。此外,免疫組化還將與其他技術(shù)(如質(zhì)譜分析、單細(xì)胞測(cè)序)結(jié)合,提供更***的蛋白質(zhì)表達(dá)和功能信息。這些技術(shù)的發(fā)展將推動(dòng)免疫組化在生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中的應(yīng)用。本回答由 AI 生成,只供參考,不構(gòu)成任何專業(yè)建免疫組化樣本如何處理?
做免疫組化時(shí)如何選擇一抗?
1、單克隆和多克隆抗體的選擇。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合,就像導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面,即使是同一個(gè)抗原決定簇,在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中,一般單克隆抗體特異性強(qiáng),但親和力相對(duì)小,檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過封閉等避免)。
2、應(yīng)用范圍的選擇。有的一抗只能用于Westernblotting,或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等;甚至標(biāo)明石蠟切片或冰凍切片。
3、種屬反應(yīng)性的選擇(speciesreactivity)。這一點(diǎn)很重要,表明這種抗體可能存在種屬差別,且這種抗體適合檢測(cè)哪種種屬動(dòng)物體內(nèi)的抗原。
4、種屬來源,一般兔來源的多是多克隆抗體;而小鼠來源的多是單克隆抗體,但也有另外。根據(jù)此來源來選擇相應(yīng)的二抗。
5、生產(chǎn)廠家的選擇。
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如何做好免疫組化實(shí)驗(yàn)?江西免疫組化外包
英瀚斯生物為您整理免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟
1、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h,脫蠟至水,用PBS沖洗三次,每次5min。
2、切片置于EDTA緩沖液中微波修復(fù),中火至沸后斷電,間隔10min低火至沸。
3、自然冷卻后PBS洗3次,每次5min。4、切片放入3%過氧化氫溶液,室溫下孵育10min,以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。
5、PBS洗3次,每次5min,甩干后5%BSA封閉20min(封閉電荷)。
6、去除BSA液,每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,4℃過夜。
7、PBS洗3次,每次5min。
8、去除PBS液,每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗,4℃孵育50min。
9、PBS洗3次,每次5min。
10、去除PBS液,每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液,顯微鏡控制顯色。
11、顯色完全后,蒸餾水或自來水沖洗,蘇木素復(fù)染,1%鹽酸酒精分化(1s),自來水沖洗,氨水返藍(lán),流水沖洗。
12、切片經(jīng)過梯度酒精(70-100%)10min一個(gè)梯度,脫水干燥,二甲苯透明,中性樹膠封固。 江西免疫組化外包