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來源: 發布時間:2023-06-09

所有真核細胞類型包括造血細胞、上皮細胞、神經細胞、干細胞、脂肪細胞和病癥細胞均可在培養條件下分泌外泌體。體內所有體液,包括血液、唾液、腦脊液、腹水,甚至尿液中都可以分離得到外泌體。這些外泌體傳輸多種信號分子,包括蛋白質、信使核糖核酸(mRNA)和非編碼核糖核酸(RNA),其攜帶的分子可以被其他細胞吸收。因此,外泌體可以將生物信息轉移到相鄰細胞。這種細胞間通信不只涉及生理功能,還涉及一些疾病的發病機理,包括瘤、心血管疾病和神經退行性疾病等。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體,有研究發現血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌。血清外泌體tmt

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在利用外泌體運輸PTX進行抗中流的研究中,由于間充質干細胞可以歸巢(homing)至中流細胞微環境并且可以不通過基因操作即可對PTX運輸,因此Pessina等采用間充質干細胞SR4987作為分泌外泌體的母代細胞,而后將SR4987與PTX共混,使SR4987分泌的外泌體含有PTX,再利用超速離心法將載有PTX的外泌體分離出來,研究其對體外人胰腺ai細胞株的影響。結果表明外泌體可以有效的運載PTX并不破壞其功能,小泡(主要指外泌體)溶液的蛋白質濃度在0.047~0.095mg/mL之間時可以誘導中流細胞凋亡50%,這種抑制效果與純PTX對體外ai細胞的抑制效果相當。外泌體豐盈建立外泌體分離、表征以及效價測定的標準化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問題。

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外泌體作為疾病診斷標志物的潛在應用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統的技術突破,要將其用于臨床治理,外泌體的大規模工業化生產面臨很大的挑戰。外泌體(exosome)是細胞分泌囊泡(extracellularvesicles)的一種亞型,存在于生物體液中,并參與多種生理和病理過程。外泌體被認為是細胞間通信的一種新機制,允許細胞交換蛋白質、脂質和遺傳物質。過去,細胞分泌的外泌體一度被認為只是參與廢物排泄;現在,隨著高通量蛋白質組學和基因組學的發展,外泌體被寬泛認為是生物體內細胞間短距離和長距離交流的高度保守的途徑,這種細胞間通信對于正常細胞和瘤細胞都是非常重要的。

目前,提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法,但這些方法混有非常多的雜質,必須慎重分析得到的是否是外泌體。超速離心法存在操作繁雜、回收量不穩定,不能用于定量分析、必須使用昂貴的超速離心機、無法進行多樣品分析等問題。因此外泌體研究相對困難,需要盡快開發操作簡單、可提取高純度外泌體的技術。因此,日本和光著眼于巨噬細胞的外泌體受體Tim4蛋白,制備Tim4細胞外域與磁珠結合的“Tim4磁珠”。Tim4通過磷酯酰絲氨酸(PS)法特異性結合Tim4蛋白和磁珠,再經過含有EDTA的洗脫緩沖液進行分離,提取高純度的完整外泌體。外泌體的異質性可以根據其大小、含量(載物)、對受體細胞的功能影響以及細胞來源來區分。

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小鼠骨髓樹突狀細胞產生的外泌體中含有的中流多肽能夠啟動特異性細胞毒性T淋巴細胞,根除或抑制小鼠中流的生長,這一發現為中流免疫zhiliao提供了新的研究思路。另外,樹突狀細胞來源的外泌體也能夠通過激huo其他免疫細胞誘導抗中流反應,從而抑制中流。B細胞分泌的外泌體包含MHCⅡ-多肽復合物,能夠激huo人和小鼠抗原特異性T細胞,從而實現調節免疫響應的功能。細菌或病原體感ran的巨噬細胞外泌體能夠刺激巨噬細胞和中性粒細胞分泌炎性介質,在增強機體免疫監督方面發揮重要作用。外泌體是包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30–150nm),由所有體外和體內細胞持續分泌。植物外泌體提取試劑盒

細胞外囊泡(EVs)表示了細胞間通訊的一個重要模式。血清外泌體tmt

外泌體是具有雙層脂膜的囊泡結構,其穩定性較好,可保護內部生物分子免受體液中各種酶的影響,從而保持其完整性和生物活性。外泌體被提取后一般懸浮于磷酸鹽緩沖液。目前,常用的儲存方法為冷凍保存,但是冷凍保存可能會導致外泌體形狀與物理性質的改變,也可能導致多層囊泡的形成和聚集,反復凍融會導致外泌體表面分子的生物特性、含量和標志物組成發生變化。血清中包含外泌體在內的細胞外囊泡DNA在不同儲存環境可保持穩定,血漿存放于4°C時其RNA會明顯降解,在–20°C下長期保存也會導致血漿中外泌體總RNA降解,但miRNA卻十分穩定,這也提示了外泌體miRNA作為生物標志物的潛力。血清外泌體tmt

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