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細胞外泌體lncRNA測序

來源: 發布時間:2023-07-06

液體活檢是一種非侵入性的血液檢測突破性技術,能早期快速地檢測中流及其病灶或者轉移過程中釋放到血液中的循環中流細胞(circulatingtumorcell,CTC)、循環中流DNA(circulatingtumorDNA,ctDNA)和中流外泌體等中流組分。中流外泌體作為液體活檢的一個重要組成,基于其內容物成分多樣和穩定等優勢,正成為中流標志物相關研究的熱點。中流來源納米大小的外泌體具有易通過血腦屏障、天然的歸巢特性、雙分子層脂質結構的穩定性和高效的生物相容性等特征。因此,中流外泌體正成為中流靶向zhiliao理想的載體,尤其是工程化外泌體更表現出很好的中流靶向干預和增強藥物zhiliao的效果。超速離心是從生物體液或細胞上清分離外泌體的金標準方法。細胞外泌體lncRNA測序

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外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡,直徑約為30-200nm,形態也呈現出多樣性。長鏈非編碼RNA(longnon-codingRNA)是一類轉錄本長度超過200nt、不編碼蛋白的RNA。近年來的研究表明lncRNA能在標貫遺傳、轉錄及轉錄后水平上調控基因表達,參與了X染色體沉默、基因組印記以及染色質修飾、轉錄jihuo、轉錄干擾、核內運輸等多種重要的調控過程,與人類疾病的發生、發展和防治都有著密切聯系。lncRNA芯片對lncRNA進行功能研究也被更多的關注,通過設計不同的lncRNA探針,可以更加快速、高通量地篩選出疾病或特定生物學過程中差異表達的lncRNA和mRNA信息,找到lncRNA的靶基因位點深入分析調控機制。腦脊液外泌體miRNA測序外泌體是細胞在特定條件下分泌的小囊泡,是細胞間傳遞信號,相互溝通和影響的重要工具。

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外泌體的提取方法:免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進行下一步的實驗。PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態完整,純度較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養和體內注射。PS法可提取相當高純度的外泌體。色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不寬泛。

外泌體中存在著某些特定的蛋白質、脂質和多糖,基于抗原–抗體特異性識別和結合作用原理,可將外泌體從其他組分中分離出來。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜聯蛋白、上皮細胞黏附分子或肝素等都可以作為抗原,而捕獲外泌體的抗體可以附著在平板、磁珠、二氧化硅、樹脂、膜親和過濾器、纖維素濾膜、聚酰氨基胺樹狀聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶聯免疫吸附法和磁珠法等。酶聯免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作為抗體附著介質,其結果用吸光度值表示,該方法可以快速分析已知表面生物標志物的表達,也可以瞬時讀出外泌體的產量和特異性。磁珠法多使用共價包覆鏈霉親和素的磁珠,與樣品一起孵育后可通過磁泳將被結合的外泌體從樣品組分中分離出來。鑒于微米級磁珠可賦予更大的接觸面積,該方法不jin具有高度特異性,還具有比超速離心更高的外泌體產率。利用外泌體自身的物理化學性質所研發的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。

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外泌體是由細胞細胞質內的晚期內泡小體以膜融合的方式通過胞吐方式主動分泌到細胞外環境的一種直徑30-100nm的微型囊泡,其形態規則,呈圓形或橢圓形杯狀結構,不同類型細胞分泌的外泌體具有很多共性,包括膜上富含脂筏及豐富的跨膜蛋白,如四次跨膜蛋白家族成員CD63、CD81等,表面為類似于細胞膜的脂質雙分子層,具有一定的疏水性。外泌體能夠攜帶微小RNA(microRNAs,miRNAs)、RNA、蛋白質等生物活性分子,并在細胞外環境穩定存在,而且通過傳遞供體細胞信息,調節靶細胞的代謝通路。外泌體可由多種類型細胞分泌,妊娠期母體血清中存在表達胎盤堿性磷酸酶(placentalalkalinephosphatase,)的胎盤來源外泌體,并且在妊娠中發揮重要的作用。關于外泌體相關的實驗技術,關于需要改進的課題存在很多。腦脊液外泌體miRNA測序

外泌體作為蛋白質的藥物遞送載體。細胞外泌體lncRNA測序

外泌體在神經系統中與神經回路的控制相關,同時各種神經退行性疾病的致病蛋白還可以通過外泌體釋放到細胞外并傳遞到其他細胞,與病情發展密切相關。病細胞釋放的外泌體含有許多與血管新生和免疫逃逸相關的分子,構建適合病細胞生長的微環境,促進病細胞的發展。另外,病細胞來源的外泌體上粘著分子的表達形式決定著癥狀向身體部位的轉移途徑。近,有報告指出脂肪細胞釋放的外泌體對肝臟的遺傳基因表達有控制作用。許多病毒利用外泌體的產生路徑傳播細胞,受病毒傳播的細菌和寄生蟲通過外泌體控制其他受細胞傳播的細菌、寄生蟲的活動。細胞外泌體lncRNA測序

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