盡管成熟卵母細胞紡錘體冷凍保存技術取得了進展,但仍面臨一些挑戰。首先,冷凍損傷仍然是制約其臨床應用的主要問題之一。盡管玻璃化冷凍法能夠在一定程度上減少冷凍損傷,但仍無法完全避免。其次,冷凍保存后的卵母細胞在體外受精和胚胎發育過程中的表現仍存在不確定性。這可能與冷凍過程中紡錘體和染色體的損傷有關,也可能與冷凍保護劑的殘留毒性有關。此外,法律倫理問題也是卵母細胞冷凍保存技術面臨的一大挑戰。不同國家和地區對卵母細胞冷凍保存的法律和倫理規定各不相同,這在一定程度上限制了該技術的普及和應用。紡錘體的功能異常與某些藥物的副作用有關,如化療藥物可能干擾紡錘體的形成和功能。昆明核移植紡錘體Oosight Meta
在生殖醫學領域,卵母細胞的冷凍保存技術一直是研究的熱點,旨在提高女性生育能力的保存與利用。然而,傳統的紡錘體觀察方法往往需要對卵母細胞進行固定和染色處理,這不僅破壞了細胞的活性,還限制了對其發育潛能的深入評估。偏光成像技術,特別是Polscope偏振光顯微成像系統,通過利用紡錘體微管結構的雙折射性,實現了對紡錘體的無損觀察。這種技術無需對卵母細胞進行固定和染色,能夠在保持細胞活性的同時,實時、動態地觀察紡錘體的形態和變化。這不僅提高了觀察的準確性和可靠性,還避免了傳統染色方法可能帶來的細胞損傷和誤差。美國MII期紡錘體Oosight Meta紡錘體在細胞分裂過程中與細胞骨架協同工作。
紡錘體觀測儀在補救ICSI中的應用我們知道,成熟的卵母細胞排出***極體。IVF加入精子后,精子會穿透層層障礙**終進入卵子,隨著時間的推移,卵子的紡錘體會將染色單體拉向兩極,進而排出第二極體,再往后大約加精后9-16小時,雌雄原核會出現,而原核的出現才是受精的標志。但是對于那些沒有受精的卵子,到了原核出現的時間窗,發現沒有受精時再去補救ICSI,往往錯過了卵子的比較好受精時間,因為沒有受精的卵子會在體外老化,即使受精,胚胎的發育潛能也很低。所以,我們在加精后的4-6小時,通過觀察第二極體的排出來初步判斷是否受精,**的增加了那些受精障礙患者的受精率,也避免了卵子的老化。當然,偶爾也會出現錯誤補救。文獻報道對IVF受精后的未排出第二極體的卵母細胞進行ICSI補救,實驗組用紡錘體觀測儀觀察并統計紡錘體的數目,82.7%含有一個紡錘體,17.3%含有兩個紡錘體,并對含有一個紡錘體的卵母細胞進行補救ICSI;而對照組并未用紡錘體觀測儀觀察紡錘體,只對未排出第二極體的卵母細胞進行補救ICSI。結果發現,使用紡錘體觀測儀觀察紡錘體的數目能顯著提高正常受精率,降低多原核受精比率。
近年來,隨著成像技術的飛速發展,特別是紡錘體成像技術的不斷進步,科學家們得以在高分辨率下觀測細胞分裂過程,從而揭示了紡錘體的許多未知特征和機制。紡錘體成像技術的發展可以追溯到上世紀末,當時科學家們開始利用熒光顯微鏡技術觀測細胞分裂過程。然而,由于傳統熒光顯微鏡的分辨率限制,紡錘體的精細結構和動態變化往往難以被清晰捕捉。為了克服這一難題,科學家們開始探索更高分辨率的成像技術,如電子顯微鏡、超分辨率顯微鏡等。然而,這些技術在實際應用中面臨著諸多挑戰,如樣品制備復雜、成像速度慢、對細胞活性影響大等。近年來,隨著成像技術的不斷創新和進步,紡錘體成像技術取得了突破性進展。特別是超分辨率顯微鏡技術的出現,如結構光照明顯微鏡(SIM)、受激輻射損耗顯微鏡(STED)和單分子定位顯微鏡(SMLM)等,使得科學家們能夠在納米尺度上觀測紡錘體的精細結構和動態變化。紡錘體是細胞分裂過程中形成的復雜細胞器,主要由微管和中心體構成。
盡管紡錘體在有絲分裂與減數分裂中的作用有所不同,但兩者也存在一些共性。首先,紡錘體的形成都依賴于中心體的復制和分離,以及微管的動態生長和縮短。其次,在有絲分裂和減數分裂的中期,染色體都排列在赤道板上,形成了清晰的紡錘體結構。此外,在有絲分裂和減數分裂的后期,染色體的著絲點都一分為二,導致姐妹染色單體或同源染色體分離,分別移向細胞的兩極。這一過程確保了每個子細胞都能獲得完整的染色體組。盡管紡錘體在有絲分裂與減數分裂中存在共性,但兩者也存在明顯的差異。紡錘體形成和功能的調控涉及多個信號通路。深圳卵母細胞紡錘體紡錘體結構
紡錘體的形成需要多種蛋白質的參與,包括微管相關蛋白和中心體蛋白等。昆明核移植紡錘體Oosight Meta
如何觀察紡錘體呢?在普通光學顯微鏡下,人類卵母細胞是半透明的,無法對紡錘體的結構進行觀察和分析。傳統方法是用一種特異的DNA熒光染料對卵母細胞染色,在紫外光下可顯示紡錘體,這種免疫熒光方法對卵母細胞有損傷,不能應用于臨床。為了更好的觀測紡錘體,美國海洋生物學實驗室的R.Oldenbourg等利用紡錘體的雙折射特性,開發出偏振光顯微鏡。現今,偏振光顯微鏡已經發展成為一種無創性的觀察和分析紡錘體動態結構的顯微觀測系統,我們也叫它紡錘體觀測儀。它不僅能對雙折射性紡錘體信號的有無進行定性分析,還能對信號的強弱進行定量分析。昆明核移植紡錘體Oosight Meta