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乳鼠動物模型實驗

來源: 發布時間:2024-02-26

    或者是還包括為這種過程、方法、物品或者設備所固有的要素。在沒有更多限制的情況下,由語句“包括一個……”限定的要素,并不排除在包括所述要素的過程、方法、物品或者設備中還存在另外的相同要素。以下結合實施例對本實用新型的特征和性能作進一步的詳細描述。實施例1本實用新型提供一種高原性人類疾病模型制備環境模擬系統,包括功能設備集成底座1和設置在功能設備集成底座1上的飼養倉2,所述飼養倉2具有無極調控微負壓裝置、高原低氧環境模擬裝置、高原光照環境模擬裝置15、高原溫度環境模擬裝置16、高原濕度環境模擬裝置17、動物行為學遠程觀察單元18,所述飼養倉2內設置有若干代謝籠3,飼養倉2前后箱體上設置有觀察窗4和若干操作窗5,飼養倉2左右箱體上分別設置有小物件傳遞窗6和大物件傳遞窗7,所述代謝籠3還包括設置在代謝籠3上的投料斗8、飲水瓶9和設置在代謝籠3下方的聚糞斗10、尿液排出口11、糞便排出口12。本實施例的工作原理:本裝置的各個功能均通過設置在飼養倉2上的功能控制面板19控制,本裝置外形采用304不銹鋼,具有良好的氣密性。實驗動物送入飼養倉2內部后,關閉小物件傳遞窗6和大物件傳遞窗7,通過功能控制面板19實現飼養倉2內部環境模擬。動物模型的優越性主要表現在以下幾下方面。乳鼠動物模型實驗

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    然后5%的nds。含有%triton)封閉通透2h,孵育一抗,4℃過夜。第二天,pbs清洗三次后,孵育相應的熒光二抗,然后再用pbs清洗三次,封片,觀察。結果見圖8,在小鼠4月齡時,通過視網膜冰凍組織切片染色外節抗體rhodopsin以及內節抗體nak-atpase后發現,相較于野生型小鼠,gm20541基因敲除純合子小鼠(圖中sixko)視網膜外節明顯縮短,表現出了明顯退化表征。綜上,可以看出,本發明實施例以小鼠為例,通過cre-loxp基因敲除技術,在小鼠視網膜前體細胞中特異性敲除gm20541基因,小鼠表現出了視力受損,視細胞外節變短退化以及視細胞丟失等視網膜色素變性疾病典型表征。由此充分說明,在視網膜前體細胞敲除gm20541基因,可以使目標動物表現出視網膜色素變性疾病。視網膜前體細胞敲除gm20541基因的動物,可以作為視網膜色素變性疾病模型。該疾病模型可以用于視網膜色素變性疾病研究等領域中,為該疾病的研究例如發病過程、機制以及相關藥物的篩選提供一種新的模型。雖然本發明實施例展示了在小鼠的視網膜前體細胞敲除gm20541基因后的表型,但本領域技術人員容易理解到,小鼠作為哺乳動物的代表性動物,在其他的哺乳類動物中敲除gm20541基因或其同源基因也應當具有相似的表型。高脂高糖動物模型造模建立SD大鼠頸動脈損傷(結扎套管)模型。

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    40mmnaoh,),并在金屬浴100℃加熱1h;(3)取出離心管,冷卻至室溫后,加入100μl的中和液(40mmtris-hcl,),10000g離心2min后,取上清用于小鼠基因型鑒定。(3)pcr擴增:按照如系配置pcr反應體系2×taqmix:10μl尾巴組織裂解液:2μl引物1(gm20541-loxp-forward或six3-cre-forward):1μl(濃度:10mm)引物2(gm20541-loxp-reverse或six3-cre-reverse):1μl(濃度:10mm)ddh2o:6μl。引物序列如下:gm20541-loxp-forward序列:5’-attccccttcaagatagctac-3’;gm20541-loxp-reverse序列:5’-aatgatcaactgtaattcccc-3’;six3-cre-forward序列:5’-gccgccgggatcactctcg-3’;six3-cre-reverse序列:5’-ccagccgccgtcgcaactc-3’。擴增程序:pcr反應體系配制完后,在pcr儀上于95℃預加熱5分鐘使模板dna充分變性,然后進入擴增循環。在每一個循環中,先于95℃保持30秒鐘使模板變性,然后將溫度降到復性溫度58℃,保持30秒,使引物與模板充分退火;在72℃保持30秒,使引物在模板上延伸,合成dna,完成一個循環。重復這樣的循環25次,使擴增的dn段大量累積。,在72℃保持5分鐘,使產物延伸完整,4℃保存。(4)凝膠電泳稱取1g瓊脂糖放于100mltaebuffer中。

    動物的選擇目前常用的模式生物有果蠅、酵母、小鼠、斑馬魚等。目前主要是小鼠黑色素瘤模型。造模方法黑色素瘤小鼠模型可分為誘發性模型、移植性模型、轉基因模型。一、誘導性模型應用:誘導的小鼠模型模擬人類受外界因素影響獲得的黑色素瘤,常用于研究預防黑色素瘤形成。1紫外線誘導的小鼠模型通過紫外線照射獲得的黑色素瘤模型被認為是臨床上可靠的模型。方法:有研究者將HGF/SFcDNA表達的小鼠置于日光燈下用不同劑量(kJ/m2UVB、kJ/m2UVA、)進行紫外誘導15min。模型驗證:誘導后的小鼠出現皮膚發紅,偶有淺表皮脫屑,在組織病理學中觀察到小鼠產生的大多數皮膚黑色素瘤中具有真皮成分,病變顯示具有垂直生長期或浸潤性惡性黑色素瘤以及淋巴結轉移,這些病變與人類患者黑色素瘤頁面狀擴散的表皮內病變特征相似。缺點:但野生型或正常型小鼠一般不易發生UV誘導的黑色素瘤,因此UV誘導的黑色素瘤小鼠模型往往需要聯合免疫缺陷小鼠,其操作技術較難、成本較高。2化學誘導化學致物誘導黑色素瘤小鼠模型大多采用DMBA和TBA誘導。DMBA是一種免疫抑制多環芳烴,其致機理是其活性代謝物被CYP450代謝成致物1,2-環氧化物-3,4-二醇DMBA,進而損傷DNA。TPA是通過蛋白激酶C充當啟動子。合理建立周圍性面癱動物模型對進一步深入研究具有重要意義。

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    一種是用beta巰基乙醇打開蛋白質分子二硫鍵的,另一種是用DTT(二硫蘇糖醇)。兩者的作用是一樣的,但特點不一樣,前者更容易與氧氣反應,穩定性比后者差,如果在常溫下暴露在空中,前者只能維持24小時的活性,后者卻可以維持7天左右。所以該如何選擇?如果是蛋白樣品較少,跑幾次就可以用完的樣品,這時選擇beta巰基乙醇。如果樣品很多,計劃跑上幾十次的,優先選擇DTT,建議變性后分裝保存。二、SDS-PAGE凝膠配制1、配膠前準備首先強調一下,一塊好的膠是跑好蛋白的前提,所以這個環節也不容忽視。玻璃板的選擇,一種是1毫米厚度的,另一種是,這個厚度選擇也是有講究的,如果上樣體積小于10微升,優先選1毫米,否則選。原因是什么?答案在轉膜部分揭曉。還有分離膠的濃度也要選擇適合的。然后玻璃板和梳子要洗干凈,晾干。裝板,注意厚板和薄板的底部要對齊,否則會漏膠。加制膠的各成分前,要觀察液體是否有沉淀,有沉淀的盡量不要用。2、制膠按配方說明依次加入各組分,加完SDS后先簡單手動搖勻幾下,然后迅速加入過硫酸銨和TEMED,搖勻,緊接著就灌膠。然后我習慣用95%的酒精壓膠,我也用過純水,感覺純水壓沒那么好,由于水的密度較大,會把分界處的膠壓得膨大。由于卵巢早衰的病因多種多樣,如自身免疫功能異常、遺傳因素、代謝因素、化療、放療及等。云南模式動物模型造模

急性肺損傷(acute lung injury,ALI)。乳鼠動物模型實驗

    缺點:該移植模型的原發出現與轉移發生之間時間間隔短,不利于藥物藥效研究;且細胞為鼠源,與人類有一定的差異。2異種移植模型異種移植模型是將人類的細胞或組織移植入免疫缺陷型實驗動物體內。此模型一般采用免疫缺陷型小鼠,例如無胸腺裸鼠、CB17-SCID小鼠、NOD/SCID小鼠、NSG小鼠。一般來說,免疫缺陷程度越高,成瘤性越好。的相關研究中,人源細胞系異種移植(cell-line-derivedxenograft,CDX)模型和患者組織異種移植(patient-derivedxenograft,PDX)模型已得到廣泛應用。CDX模型方法:將5×106的人A375黑色素瘤細胞皮下注射NOD/SCID小鼠腹側的雙側,成功構建黑色素瘤CDX模型。PDX模型方法:有研究者將93個新鮮的患者組織切成2×2×2mm3碎片的大小,皮下接種6周大的NOD/SCID雌性小鼠,建立PDX模型。優點:保留了病人的組織學和遺傳學特征,可模擬潰瘍狀態對人類黑色素瘤預后的影響。缺點:此模型移植后的潛伏期長,連續傳代后鼠基質被人類基質替代,移植率可變,免疫系統受損,有移植物抗宿主病的可能性以及某些免疫細胞功能的缺乏。三、轉基因小鼠模型可以通過異位表達基因,引入特定的致突變或滅活抑制基因來對小鼠進行轉基因黑色素瘤模型的構建。乳鼠動物模型實驗

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