高效液相色譜分離原理

離子對

(Ion Pair Chromatography)

離子對色譜法是將一種 ( 或多種 ) 與溶質分子電荷相反的離子 ( 稱為對離子或反離子 ) 加到流動相或固定相中，使其與溶質離子結合形成疏水型離子對化合物，從而控制溶質離子的保留行為。其原理可用下式表示：X水相Y-水相 === X Y-有機相

式中：X 水相--流動相中待分離的有機離子（也可是陽離子）；Y-水相--流動相中帶相反電荷的離子對（如氫氧化四丁基銨、氫氧化十六烷基三甲銨等）；X Y---形成的離子對化合物。

當達平衡時：

KXY = [X Y-]有機相/[ X ]水相[Y-]水相

根據定義，分配系數為：

DX= [X Y-]有機相/[ X ]水相= KXY [Y-]水相

[討論：DX與保留值的關系]

離子對色譜法（特別是反相）解決了以往難以分離的混合物的分離問題，諸如酸、堿和離子、非離子混合物，特別是一些生化試樣如核酸、核苷、生物堿以及藥物等分離。

一套設備可以同時實現在線分析與離線柱平衡再生，提升檢測器或質譜在線利用率。新疆專業高效液相色譜系統廠家直銷

高效液相色譜法有“四高一廣”的特點：

①高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。

②高速：分析速度快、載液流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內即可完成，一般小于1小時。

③高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到比較好分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

④高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數量級。

⑤應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。

⑥柱子可反復使用：用一根柱子可分離不同化合物

⑦樣品量少、容易回收：樣品經過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。

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賽默飛世爾Vanquish 超高效液相色譜系統產品簡介

Thermo Scientific? Vanquish? Duo UHPLC 系統，將兩套梯度流路整合在一個超高效液相系統里，并能實現三種不同工作流程（雙LC，串聯液相或LCMS質譜前端，以及反梯度）這些工作流程可通過節約時間、減少每份樣品的成本、在不額外增加工作臺面的情況下提高儀器設備容量并更加高效地利用資源，以提升生產率。Vanquish Duo UHPLC 系統可在不影響性能、穩定性或易用性的情況下擴大 Vanquish 平臺的優勢。

串聯 LC 或 LC-MS應用提**析通量 Vanquish Duo系統

很大程度地 提高了質譜儀的利用率

梯度分離通常用于 LC 或 LC-MS。色譜柱清洗和重新平衡耗費時間長從而降低了總體樣品通量。串聯 LC或 LC-MS 的 Vanquish Duo 系統通過以下方式消除了這些限制并提高了分析效率：

? 在不更改驗證方法的情況下增加了樣品通量

? 通過盡可能地提高儀器利用率增加了投資回報

? 通過延伸的色譜柱清洗方法減少了色譜柱殘留量，同時不影響通量

? 根據原始梯度方法自動進行串聯方法轉換，簡化了雙梯度方法設置

通過 Vanquish 二元泵 H 模塊的流暢運送和正確梯度獲得一致結果。

高效液相色譜相關術語

色譜圖(chromatogram)——樣品流經色譜柱和檢測器，所得到的信號-時間曲線，又稱色譜流出曲線(elution profile)。

基線(base line)——經流動相沖洗，柱與流動相達到平衡后，檢測器測出一段時間的流出曲線。一般應平行于時間軸。

噪音(noise)——基線信號的波動。通常因電源接觸不良或瞬時過載、檢測器不穩定、流動相含有氣泡或色譜柱被污染所致。

漂移(drift)——基線隨時間的緩緩變化。主要由于操作條件如電壓、溫度、流動相及流量的不穩定所引起，柱內的污染物或固定相不斷被洗脫下來也會產生漂移。

可支持三個工作流程。雙梯度流路。同一集成式系統。上海專業液相色譜系統供應商

通過添加可選 Thermo Scientific? Vanquish? 加載裝置，提升至 8832 樣品容量（23 孔板）。新疆專業高效液相色譜系統廠家直銷

高效液相色譜綜述

HPLC的出現不過三十多年的時間，但這種分離分析技術的發展十分迅猛，應用十分***。其儀器結構和流程多種多樣。典型的高效液相色譜儀結構和流程可用下列方框圖表示(See Fig.3-4)。高效液相色譜儀一般都具備貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置（用雙泵）、進樣器、色譜柱、檢測器、恒溫器、記錄儀等主要部件。

高效液相色譜更適宜于分離、分析高沸點、熱穩定性差、有生理活性及相對分子量比較大的物質，因而廣泛應用于核酸、肽類、內酯、稠環芳烴、高聚物、藥物、人體代謝產物、表面活性劑，抗氧化劑、殺蟲劑、除銹劑的分析等物質的分析。

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