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我們知道WB實驗步驟繁瑣，一次實驗歷時也不短，從提蛋白到顯影結束可能要三天，我們就講一下這里面的一些關鍵環節。一、蛋白提取及變性1、提取蛋白很多經驗豐富的WB實驗者都深有體會，蛋白提取是影響結果重要的環節之一。該過程重要的是防降解和保證蛋白濃度不要太低。防降解主要有兩點，一是裂解前注意保持樣品處于低溫環境中，二是裂解時加入足夠的蛋白酶抑制劑。我們習慣先用冰冷的PBS做心臟的體循環灌注，然后冰上取腦，分離各腦區(嗅球，皮層，海馬，中腦，小腦，延髓，丘腦，紋狀體)后置于，用液氮速凍后轉移至-80度冰箱長期保存。接著是保證蛋白濃度，即要加入適量的裂解液，加太少會使蛋白提取不充分，加太多會讓蛋...

中風模型）股動脈內皮損傷模型頸動脈結扎或部分結扎術深靜脈血栓模型下肢缺血模型門腔靜脈分流術左、右心血流動力學測試左心系統測壓右心系統測壓腹部手術膽管結扎術胃大部切除術小腸部分切除術急性腎衰模型單側腎切除術3/4腎切除術5/6腎切除術脾切除術腎上腺切除術腎上腺髓質摘除術骨關節炎模型脾神經切除術肝臟迷走神經切斷術胃迷走神經切斷術膈下迷走神經切斷術去勢術輸精管結扎術卵巢切除術單側或雙側輸卵管結扎術子宮切除術輸尿管結扎術神經系統手術單側腦內定位插管雙側腦內定位插管側腦室導管側腦室微量滲透泵導管第3腦室插管腓腸肌神經切除術軟組織手術甲狀腺切除術甲狀旁腺切除術甲狀腺切除術伴甲狀旁腺再植入術胸腺切除...

表明在gm20541敲除鼠視網膜外節變短退化。sixko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型小鼠；dapi(4',6-diamidino-2-phenylindole)：細胞核染料4',6-二脒基-2-苯基吲哚；rhodopsin：視紫紅質抗體；merge：兩種顏色重疊。具體實施方式為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。以下結合實施例對本發明的特征和性能作進一步的詳細描述。實施...

腹主動脈縮窄致心衰大鼠模型一、服務信息1、動物模型名稱：腹主動脈縮窄致心衰大鼠模型2、實驗動物種屬：SD大鼠3、實驗動物性別：雌性4、實驗動物年齡：成年5、實驗動物體重：180~220g6、實驗動物環境：SPF級二、服務項目服務編號服務內容服務周期價錢DH2015腹主動脈縮窄致心衰大鼠模型15周詢價1、實驗方法：采用主動脈縮窄法建立模型大鼠麻醉后，仰臥位固定、去腹毛、消毒，沿腹正中線切開皮膚及肌層，分離出腹主動脈，在腎動脈上方將腹主動脈與鈍頭8號探針一起結扎后，小心抽出針頭。手術造模后大鼠正常飼養3個月。大鼠終末體重(BW),心室重(VW),計算心體比(VW/BW),并進行心功能檢測,...

動物的選擇目前常用的模式生物有果蠅、酵母、小鼠、斑馬魚等。目前主要是小鼠黑色素瘤模型。造模方法黑色素瘤小鼠模型可分為誘發性模型、移植性模型、轉基因模型。一、誘導性模型應用：誘導的小鼠模型模擬人類受外界因素影響獲得的黑色素瘤，常用于研究預防黑色素瘤形成。1紫外線誘導的小鼠模型通過紫外線照射獲得的黑色素瘤模型被認為是臨床上可靠的模型。方法：有研究者將HGF/SFcDNA表達的小鼠置于日光燈下用不同劑量(kJ/m2UVB、kJ/m2UVA、)進行紫外誘導15min。模型驗證：誘導后的小鼠出現皮膚發紅，偶有淺表皮脫屑，在組織病理學中觀察到小鼠產生的大多數皮膚黑色素瘤中具有真皮成分，病變顯示具有...

伴vonFreyhairs檢測）熱板法大/小鼠甩尾法大/小鼠熱輻射致痛法大/小鼠壓痛法大/小鼠VonFreyhairs法大/小鼠醋酸扭體法小鼠福爾馬林致痛法大/小鼠佐劑CFA引起的疼痛大/小鼠角叉菜膠致痛模型大/小鼠LPS誘導痛模型大/小鼠脊神經選擇性結扎（L5/L6）大/小鼠坐骨神經分枝選擇性損傷模型（SNI）大/小鼠糖尿病疼痛、切口疼痛，性疼痛模型大/小鼠抗癡呆小鼠獲得性記憶障礙模型（6道小鼠跳臺視屏分析系統）小鼠小鼠記憶鞏固不良模型（6道小鼠跳臺視屏分析系統）小鼠小鼠記憶再現障礙模型（6道小鼠避暗視屏分析系統）小鼠小鼠明暗箱法（4道小鼠明暗箱視屏分析系統）小鼠大鼠獲得性記憶障礙模...

擴增產物為。其中a2,3,6,9,10,b1為陽性。擴增3’端長臂使用引物：neof:5’-cgccttcttgacgagttcttctga-3’；gm3’lrr:5’-ggtgcttgagtagtgttgaatctcagtggacca-3’結果見圖3中b，擴增產物為。其中：a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g為陽性雜合子，+/+為野生型對照。5將步驟4得到的雜合子小鼠動物與轉基因鼠flper鼠交配繁育，得到gm20541基因條件性敲除雜合子小鼠；6將步驟5得到的gm20541基因條件性敲除雜合子小鼠相互交配繁育，得到gm20541基因條件性敲除純合子小鼠；7將步驟6得...

把膜先用TBST泡洗兩遍再用5%脫脂奶粉或者BSA室溫封閉1-2小時。注意一定要讓蛋白面充分接觸封閉液。2、孵一抗脫脂奶粉封閉的話，要用TBST泡洗三遍再轉移至一抗溶液中，BSA封閉的可以直接轉移至一抗中。如果膜的寬(膜是一個長方形，這里的寬與長相對應)不大于8毫米，我習慣置于15毫升離心管中孵育，兩條膜"背對背"式放置于一個管子里(3毫升液體即可)。如果大于8毫米，就用普通的5格的一抗孵育盒(4毫升即可)。4度過夜，一般是12-18個小時，注意放置水平，用搖床。內參等蛋白豐度很高的如果孵久了可能出現條帶連在一起的情況，這時可以縮短孵育時間或者降低一抗的濃度。六、孵二抗顯影1、孵二抗室...

可在設定的壓差標準內無極調控，以保障系統對海拔(3000m～7000m)的微負壓進行模擬。并且，進排風風管裝有高效空氣過濾器，使進入飼養倉2的氣體潔凈。實施例3在實施例1的基礎上提供的一種高原性人類疾病模型制備環境模擬系統，所述高原低氧環境模擬裝置包括惰性氣源，所述惰性氣源與進風系統13連接，所述惰性氣源與進風系統13之間設置有比例式氣閥，還包括設置在飼養倉2內的嵌入式氧測定儀。本實施例的工作原理：惰性氣源可以是惰性氣體儲備罐或者是液態惰性氣體儲備罐。在模擬低氧環境時，外接惰性氣體儲備罐連接進風系統13。比例式氣閥和嵌入式氧測定儀均與功能控制面板19連接，通過功能控制面板19上的氧濃度...

一種是用beta巰基乙醇打開蛋白質分子二硫鍵的，另一種是用DTT(二硫蘇糖醇)。兩者的作用是一樣的，但特點不一樣，前者更容易與氧氣反應，穩定性比后者差，如果在常溫下暴露在空中，前者只能維持24小時的活性，后者卻可以維持7天左右。所以該如何選擇?如果是蛋白樣品較少，跑幾次就可以用完的樣品，這時選擇beta巰基乙醇。如果樣品很多，計劃跑上幾十次的，優先選擇DTT,建議變性后分裝保存。二、SDS-PAGE凝膠配制1、配膠前準備首先強調一下，一塊好的膠是跑好蛋白的前提，所以這個環節也不容忽視。玻璃板的選擇，一種是1毫米厚度的，另一種是，這個厚度選擇也是有講究的，如果上樣體積小于10微升，優先選...

指明方向。盡管現在基因組學、轉錄組、蛋白質組等組學已經取得了非凡的突破，但人類對于組學的整體性和復雜性認識還是很初級，也就比開始高明那么一點點，對橫亙在組學和個體之間的裂隙毫無辦法——這也是目前生物研究被黑的重要原因之一：由于目前還不存在什么生物根本性原理，很多研究還是得靠盲人摸象式的實驗、觀察和歸納。當年山中伸彌找到誘導分化細胞核重編程（也就是IPSc技術）的四個基因，可不是用理論算出來的，是大海撈針般地從成百上千個轉錄因子基因組合中篩選出來的。盡管以前的研究能有所幫助，但本質還是差別不大，這也是為什么分子生物學科研常常被類比成民工搬磚。明白了這個背景，你大概就能理解小鼠的意義。既然...

所述外顯子序列為第3外顯子序列。進一步地，在本發明的一些實施方案中，利用cre-loxp基因敲除技術敲除gm20541基因上的第3外顯子序列。上述敲除策略是采用cre-loxp敲除技術敲除gm20541基因。但在其他的實施例中，實現基因敲除的技術手段有很多，例如crispr/cas9技術、人工核酸酶介導的鋅指核酸酶技術(zinc-fingernucleases，zfn)、轉錄因子樣效應物核酸酶技術(transceriptionactivator-likeeffectornucleases,talen)等。因此，在其他的實施例中采用crispr/cas9技術或其他的技術手段敲除gm205...

或者是還包括為這種過程、方法、物品或者設備所固有的要素。在沒有更多限制的情況下，由語句“包括一個……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的過程、方法、物品或者設備中還存在另外的相同要素。以下結合實施例對本實用新型的特征和性能作進一步的詳細描述。實施例1本實用新型提供一種高原性人類疾病模型制備環境模擬系統，包括功能設備集成底座1和設置在功能設備集成底座1上的飼養倉2，所述飼養倉2具有無極調控微負壓裝置、高原低氧環境模擬裝置、高原光照環境模擬裝置15、高原溫度環境模擬裝置16、高原濕度環境模擬裝置17、動物行為學遠程觀察單元18，所述飼養倉2內設置有若干代謝籠3，飼養倉2前后箱體上設置有觀...

可用鋨酸或甲醛蒸汽固定。主要用于血液或細胞涂片以及某些薄膜組織的固定。（2）固定的目的①保持其原有狀態：使細胞內的蛋白質、脂肪、糖、酶等成分轉變為不溶性物質，迅速防止組織、細胞的死后變化，防止自溶與，防止細胞過度收縮或膨脹而失去其原有形態結構，使之盡量保持生前的狀態和結構。②以便染色后易于鑒別和觀察：不同組織成分對染料有不同的親和力，以便染色后易于鑒別和觀察。③使組織塊硬化，便于制作薄片（組織塊在脫水、包埋、切片、染色等過程中不易損壞）。（3）固定液固定液種類：一類是單純固定液，即只有一種試劑；另一類是混合固定液，由兩種或兩種以上試劑組成。作為較好的固定液，應有下列特性，首先，有強滲透...

應根據所檢測指標的要求，需采取不同策略處理。在如今分子生物學當道的現實背景下，動物實驗除了對實驗動物的體征及生理指標進行的監控外，各種分子檢測甚至是組學檢測也開始大行其道，動物實驗結束之后的機制研究成為了實驗的重頭戲。一般來說，動物實驗檢測對象主要包括：（1）體液中各類因子定性及定量檢測由于此類檢測對象多為蛋白及各類小分子物質，因此在取樣過程中應注意防止此類物質降解，在獲取后，應及時置于溫（≤-80℃）進行保存，在后續實驗過程中，也應當注意保存條件的穩定性，避免反復凍融。常用的方法便是酶聯免疫吸附測定（ELISA），除此之外，可利用生化分析儀及不同檢測方法的試劑盒（比色法、比濁法等）方...

曾為國內、外醫藥企業做過多個藥物的臨床前藥理研究，研發產品已成功上市。在中國工作期間參加完成10項課題，在美國參與完成了NIH(NationalInstitutesofHealth)及AHA(AmericanHeartAssociation)的多個基金項目。發表學術論文60余篇，曾獲得省部級一、二等科技獎7項。在學術期刊如Nature,ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,JournalofClinicalInvestigation,Circulation,CirculationResearch,Cell,NatureCommunicati...

本發明涉及醫學工程技術領域，具體而言，涉及一種利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法和應用。背景技術：視網膜色素變性(retinitispigmentosa，rp)是一組視網膜光感受器異常導致的遺傳性致盲眼底病，在全世界的發病率約為1/3000～1/4000，而在中國人群的發病率可達1/3500，由于我國人口眾多，rp患者可達三十萬之眾，給家庭和社會帶來了沉重的負擔。目前針對rp的診斷和面臨許多困難，尚無有效的手段，這主要歸因于其在臨床表型和遺傳上具有高度的異質性，針對其病理機制系統研究不足。典型的rp患者早由于視桿細胞功能缺陷而出現夜盲和視野狹窄，逐步發展為管狀視野，...

輕微的接觸角膜的中心頂端。一通道正極接右眼，二通道正極接左眼。通過針管對雙眼滴生理鹽水，改善金環電極及角膜的接觸效果。保證兩個金環電極以相同的角度、方式接觸兩眼角膜中心正端的相同位置。5記錄示波信號確認無誤后，關閉暗紅光。可以先嘗試記錄一下暗適應光強為·s/m2的erg檢測，確認一下信號的質量：如果雙眼的振幅出現了與預期不同的較大差異，建議再次檢查金環電極的安裝位置。然后依次記錄暗適應光強為·s/m2的信號。需要注意的是，完成暗適應·s/m2光強檢測后，系統將自動打開背景光。同樣的，需要打開定時器，光適應10-15分鐘，再記錄。6經過光適應后，依次記錄光適應·s/m2以及·s/m2光強...

角膜環鉆致角膜損傷兔模型一、服務信息1、動物模型名稱：角膜環鉆致角膜損傷兔模型2、實驗動物種屬：新西蘭兔3、實驗動物性別：雌雄不限4、實驗動物年齡：2~3月齡5、實驗動物體重：6、實驗動物環境：SPF級二、服務項目服務編號服務內容服務周期價錢DH2021角膜環鉆致角膜損傷兔模型5周詢價1、實驗方法：角膜環鉆致兔角膜機械性損傷。耳緣靜脈注射戊巴比妥鈉聯合肌肉注射速眠新Ⅱ進行兔麻醉。環鉆前先用2%硼酸溶液沖洗雙眼，再滴**2滴消毒，以保持結膜清潔。開瞼，滴2%利多卡因滴眼液2滴行角膜表面麻醉，用已滅菌的6mm角膜環鉆分別在兔眼角膜上作環切，并滴入2滴氯霉素眼**潤洗，用顯微眼鑷、角膜上皮鏟...

表明在gm20541敲除鼠視網膜外節變短退化。sixko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型小鼠；dapi(4',6-diamidino-2-phenylindole)：細胞核染料4',6-二脒基-2-苯基吲哚；rhodopsin：視紫紅質抗體；merge：兩種顏色重疊。具體實施方式為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。以下結合實施例對本發明的特征和性能作進一步的詳細描述。實施...

四氯化碳誘導急性肝損傷大鼠模型【方法】1、將大鼠隨機分配至2組中，每組5只，正常喂食喂水7d后進行試驗；2、大鼠體重為200g±10g，按組別給予藥物：生理鹽水組每只腹腔注射1ml生理鹽水、模型組每只按5ml/kg背部皮下注射四氯化碳3、各組藥物注射24h后取材進行相關檢測（注：注射前按比例混合四氯化碳：橄欖油=1：）【評定】給予四氯化碳后TP含量下降，ALT和AST含量上升【檢測】生理鹽水組肝索結構清晰，血管內無淤血，血管周圍無炎癥病灶，肝小葉結構清晰；給予四氯化碳后肝索排列紊亂，結構不清，存在大量壞死區域且肝索結構消失，有大小不一的空泡結構，多數血管內有淤血并伴有粉染蛋白樣物質，血...

結果發現在這些組織中，gm20541均有表達，說明該基因可能在體內發揮重要功能。2采用免疫印跡(westernblot)的方法檢測gm20541基因在不同組織中的表達。方法：(1)分別獲取小鼠腦、肝臟、視網膜、心臟、腎臟以及脾，充分研磨后加入200μl蛋白裂解液ripa。(2)超聲破碎細胞后，在冰上裂解20min。(3)4℃，16000g離心10min后，取上清轉移至另一干凈離心管，加入50μl的蛋白上樣液，混勻后95℃加熱5min。(4)待樣本冷卻后，分別取20μl，160v電壓進行聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)以分離蛋白。(5)sds-page結束后，根據需要，裁剪適當大小...

但是目前對znf124的研究還處于初期階段，其小鼠同源基因為gm20541(predictedgene20541，mgi：5142006)，該基因位于小鼠17號染色體3，全長2750kb，其cdna全長1406bp，包含3個外顯子，其cdna序列如seqid所示，如下：gaatgcagtgacctatgatgatgtgtgtgtgaacttcactctggaagaatggactttactggatccttcacagaagagtctctacagagatgtgatgcaggaaacctacaggaatctcactgctataggctacaattgggaagatgacaatattgaagact...

技術實現要素：本發明的目的在于提供利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法和應用，采用該構建方法可以得到視網膜色素變性疾病模型，該模型可表現出視網膜色素變性性疾病特征，該模型可用于視網膜色素變性性疾病的研究，可以幫助闡明rp的發病過程及機制，并為該疾病的或預防提供新的靶標。本發明是這樣實現的：方面，本發明實施例提供了一種利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法，其包括：敲除目標動物視網膜前體細胞中的基因組中的gm20541基因。znf124是一種編碼鋅指蛋白的新基因。鋅指蛋白是一類具有手指狀結構域的轉錄因子，對基因調控起重要的作用。znf124蛋白可穿過核孔...

然后5％的nds。含有％triton)封閉通透2h，孵育一抗，4℃過夜。第二天，pbs清洗三次后，孵育相應的熒光二抗，然后再用pbs清洗三次，封片，觀察。結果見圖8，在小鼠4月齡時，通過視網膜冰凍組織切片染色外節抗體rhodopsin以及內節抗體nak-atpase后發現，相較于野生型小鼠，gm20541基因敲除純合子小鼠(圖中sixko)視網膜外節明顯縮短，表現出了明顯退化表征。綜上，可以看出，本發明實施例以小鼠為例，通過cre-loxp基因敲除技術，在小鼠視網膜前體細胞中特異性敲除gm20541基因，小鼠表現出了視力受損，視細胞外節變短退化以及視細胞丟失等視網膜色素變性疾病典型表征...

可在設定的壓差標準內無極調控，以保障系統對海拔(3000m～7000m)的微負壓進行模擬。并且，進排風風管裝有高效空氣過濾器，使進入飼養倉2的氣體潔凈。實施例3在實施例1的基礎上提供的一種高原性人類疾病模型制備環境模擬系統，所述高原低氧環境模擬裝置包括惰性氣源，所述惰性氣源與進風系統13連接，所述惰性氣源與進風系統13之間設置有比例式氣閥，還包括設置在飼養倉2內的嵌入式氧測定儀。本實施例的工作原理：惰性氣源可以是惰性氣體儲備罐或者是液態惰性氣體儲備罐。在模擬低氧環境時，外接惰性氣體儲備罐連接進風系統13。比例式氣閥和嵌入式氧測定儀均與功能控制面板19連接，通過功能控制面板19上的氧濃度...

靜置25分鐘后把酒精倒干，用吸水紙吸出多余的酒精，然后配壓縮膠，同樣的操作，關鍵是梳子要插得快，要小心梳子下產生氣泡，然后靜置30分鐘。如果是當天跑膠，我會等上層膠凝2個小時再用，但要注意防干燥縮水，可以在一個小時的時候沿著梳子上緣加點電泳液。所以我一般提前一晚制膠，泡于純水或者電泳液里置于4度冰箱暫存。三、蛋白電泳1、上樣前準備把膠組裝到電泳芯上，注意密閉性(否則漏液)，如果內槽漏液就不是勻強電場了，條帶可能就不是一條直線。然后內槽倒滿電泳液，拔梳子，這一步要小心，梳子要兩邊一起緩緩往上拔出，然后觀察泳道內有無脫落的膠粒或者膠絲，有的話用1毫升注射器吸出。然后從冰箱取出蛋白樣品，解凍...

糖尿病足大鼠模型【目的】構建糖尿病足大鼠模型；【材料】1、材料：STZ藥物、注射器、檸檬酸、檸檬酸三鈉；2、試劑配制：1）檸檬酸納緩沖液配制：A液十B液=1:，PH=；A液:檸檬酸mL；B液:朽檬酸三納2）STZ液配制:55mg/kg（避光，現配現用10min內注射)；3、糖尿病模型構建方法：1）大鼠術前禁食12h；2）按55ug/g注射.連續3天注射，對照組注射檸檬酸緩沖液，造模組注射STZ液，注射后不禁水、禁食2-4h；3）STZ注射結束5天后空腹測血糖，血糖值高于12mmol/L選入實驗組；【方法】方法一：細菌懸浮液造模1、糖尿病模型大鼠第二周至第三周時，后足背側注射l0ul金黃...

腹主動脈縮窄致心衰大鼠模型一、服務信息1、動物模型名稱：腹主動脈縮窄致心衰大鼠模型2、實驗動物種屬：SD大鼠3、實驗動物性別：雌性4、實驗動物年齡：成年5、實驗動物體重：180~220g6、實驗動物環境：SPF級二、服務項目服務編號服務內容服務周期價錢DH2015腹主動脈縮窄致心衰大鼠模型15周詢價1、實驗方法：采用主動脈縮窄法建立模型大鼠麻醉后，仰臥位固定、去腹毛、消毒，沿腹正中線切開皮膚及肌層，分離出腹主動脈，在腎動脈上方將腹主動脈與鈍頭8號探針一起結扎后，小心抽出針頭。手術造模后大鼠正常飼養3個月。大鼠終末體重(BW),心室重(VW),計算心體比(VW/BW),并進行心功能檢測,...

本實用新型屬于動物實驗設備技術領域，具體涉及一種高原性人類疾病模型制備環境模擬系統。背景技術：高原環境模擬系統可以在非高原地區“制造”出不同海拔高度和氣候條件，模擬各種高原缺氧環境，使實驗動物在一定時間內根據實驗需求達到預期的高原反應癥狀，使實驗動物表現出高原性疾病，為高原疾病研究人員提供高原疾病模型動物，便于研究或預防高原性疾病的藥物。現有的環境模擬系統可以模擬實現高原光照和低氧環境，但模型成功率較低、動物死亡率較高、造模動物種類單一。技術實現要素：本實用新型的目的在于：提供一種高原性人類疾病模型制備環境模擬系統，解決現有高原環境模擬系統中存在的模型成功率較低、動物死亡率較高、造模動...