病人在6個(gè)月后達(dá)到MRD陰性，CAR-T細(xì)胞在4.2年后仍然可以在外周血檢測(cè)到，并且骨髓中檢測(cè)不到B細(xì)胞liu克隆。二代測(cè)序整合位點(diǎn)分析顯示這是因?yàn)槟承〤AR-T細(xì)胞的融合位置位于TET2基因9號(hào)到10號(hào)外顯子之間可變剪切區(qū)域，導(dǎo)致TET2基因跳讀和功能障礙，從而產(chǎn)生短壽命記憶細(xì)胞擴(kuò)增和長(zhǎng)壽命記憶細(xì)胞。使得藥物可以持久作用于病人。研究者繼而進(jìn)行插入位點(diǎn)和CAR-T細(xì)胞擴(kuò)增及持續(xù)作用時(shí)間的相關(guān)研究，利用慢病毒插入位點(diǎn)信息（INSPIIRED）和LASSO logistic 回歸模型進(jìn)行插入位置和藥效學(xué)分析，初步建立預(yù)測(cè)模型。研究者還建議在CAR-T產(chǎn)品回輸前進(jìn)行類似的多變量預(yù)測(cè)可以對(duì)產(chǎn)品的安全性和有效性進(jìn)行更為有效的評(píng)估。crispr/cas9整合位點(diǎn)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。溫州LV整合位點(diǎn)技術(shù)

f如果RCT設(shè)計(jì)不可行，申請(qǐng)人可能在確證性臨床試驗(yàn)中采用單臂試驗(yàn)（singlearmtrial,SAT）。在這種情況下，申請(qǐng)人應(yīng)解釋無法開展RCT試驗(yàn)的理由并提供相應(yīng)研究證據(jù)，并有必要利用回顧性數(shù)據(jù)、前瞻性真實(shí)世界研究、薈萃分析或流行病學(xué)調(diào)查等數(shù)據(jù)及探索性研究結(jié)果，對(duì)受試人群、主要終點(diǎn)和預(yù)期臨床療效等研究要素進(jìn)行合理說明。RCT確證性試驗(yàn)應(yīng)在可行的情況下盡量保持盲法。對(duì)于很多免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，由于研究者或醫(yī)務(wù)人員參與細(xì)胞的采集并配合操作給藥過程，可能難以對(duì)研究者設(shè)盲，這種情況下有必要采用其它方法降低試驗(yàn)的偏倚，例如對(duì)受試者設(shè)盲。如果盲法不可行，如SAT，應(yīng)設(shè)立不受研究者影響的單獨(dú)審評(píng)委員會(huì)（independentreviewcommittee，IRC），對(duì)臨床終點(diǎn)進(jìn)行判讀并作為主要終點(diǎn)的判定標(biāo)準(zhǔn)，或?qū)ρ芯空咴u(píng)估的結(jié)果進(jìn)行敏感性分析。南通基因編輯整合位點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室整合位點(diǎn)安評(píng)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。

插入突變風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估一些整合性載體（如逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、轉(zhuǎn)座子）可將外源基因插入整合到細(xì)胞基因組中，這可能會(huì)導(dǎo)致關(guān)鍵基因突變或jihuo原基因，從而導(dǎo)致惡性liu風(fēng)險(xiǎn)增加。影響插入突變的關(guān)鍵風(fēng)險(xiǎn)因素包括：（1）載體的整合特征，如插入位點(diǎn)的偏好性；（2）載體的設(shè)計(jì)，如增強(qiáng)子、啟動(dòng)子等構(gòu)建元件的活性，影響鄰近基因的潛力；產(chǎn)生剪接突變體的潛在剪接位點(diǎn)或多聚腺苷酸信號(hào)等；（3）細(xì)胞載體拷貝數(shù)；4）轉(zhuǎn)基因表達(dá)產(chǎn)物的功能活性（如與細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控相關(guān)）和表達(dá)水平；5）靶細(xì)胞群的轉(zhuǎn)化可能性，這可能與細(xì)胞的分化狀態(tài)、增殖潛力、體外培養(yǎng)條件和體內(nèi)植入環(huán)境等有關(guān)。

慢病毒整合事件要素及檢測(cè)方法要求：對(duì)于食藥監(jiān)局指導(dǎo)性文件和既往研究?jī)?nèi)容，我們不難發(fā)現(xiàn)對(duì)于慢病毒整合檢測(cè)所謂整合事件至少包含三個(gè)要素：整合位置；整合方向；特定整合位置和整合方向的juedui克隆數(shù)目；因此檢測(cè)在定性和定量性能方面都有要求，檢測(cè)方法需要結(jié)合臨床樣本進(jìn)行分析性能進(jìn)行系統(tǒng)驗(yàn)證。慢病毒整合位點(diǎn)檢測(cè)方法，目前檢測(cè)慢病毒整合位點(diǎn)的主要平臺(tái)為高深度測(cè)序（NGS)。而目前較為成熟已經(jīng)應(yīng)用于工業(yè)產(chǎn)品檢測(cè)及臨床研究的整合位點(diǎn)富集建庫(kù)方法為機(jī)械片段化及依賴于接頭的擴(kuò)增子建庫(kù)(LM-PCR,如INSPIIRED),已經(jīng)應(yīng)用于多個(gè)CART19臨床項(xiàng)目的安全性評(píng)估及與CAR-T細(xì)胞增值相關(guān)的回顧yao效學(xué)分析。插入位點(diǎn)整合位點(diǎn)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。

給藥間隔，對(duì)于shou次在人體中開展臨床試驗(yàn)（firstinhuman,FIH）的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，采用受試者間隔給藥的方式，可以避免多個(gè)受試者同時(shí)暴露而出現(xiàn)預(yù)期外的安全性風(fēng)險(xiǎn)。在FIH試驗(yàn)中，對(duì)首例患者應(yīng)加強(qiáng)不良事件監(jiān)測(cè)，還要考慮遲發(fā)性不良事件。向同一劑量組內(nèi)下一例受試者或下一個(gè)劑量組受試者給藥前，應(yīng)規(guī)定一定的隨訪間隔，以觀察急性和亞急性不良事件。間隔期的選擇一般基于非臨床研究中急性或亞急性毒性的發(fā)生情況，細(xì)胞在體內(nèi)的活性持續(xù)時(shí)間和/或既往類似產(chǎn)品在人體中的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)。LV整合位點(diǎn)，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。北京慢病毒整合位點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

整合位點(diǎn)分析，推薦唯可生物，實(shí)驗(yàn)實(shí)力強(qiáng)，專業(yè)性高，檢測(cè)效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。溫州LV整合位點(diǎn)技術(shù)

CAR-T慢病毒載體整合的潛在安全性隱患包括CAR-Tzhiliao在內(nèi)的基因編輯性細(xì)胞zhiliao方法，采用慢病毒整合性載體將外源基因插入整合到細(xì)胞基因組中，某些插入位置可能會(huì)導(dǎo)致關(guān)鍵基因突變或jihuo原基因，從而導(dǎo)致惡性liu風(fēng)險(xiǎn)增加。因載體整合導(dǎo)致致瘤性基因變異及新發(fā)細(xì)胞變稱為二次成瘤。在持續(xù)性細(xì)胞zhiliao過程中，這種潛在的成瘤性不良反應(yīng)的發(fā)生時(shí)間往往會(huì)有明顯的滯后性且很難預(yù)測(cè)。因此CAR-Tzhiliao需要評(píng)估潛在的插入突變風(fēng)險(xiǎn)和致性風(fēng)險(xiǎn)。溫州LV整合位點(diǎn)技術(shù)