BLESS：利用生物素標簽對DSBs進行原位標記，后經PCR擴增實現對于生物素標記片段的富集，并通過二代測序實現脫靶位點檢測。直接檢測細胞中的切割位點，靈敏度與細胞、組織密切相關。LAM-HTGTS，片段化的gDNA經過LAM-PCR引入接頭，然后進行全基因組易位測序。高通量的全基因組范圍檢測，可準確檢測DSBs引發的重排。GUIDE-Seq，將dsODN    s標簽整合到DSBs位點，通過二代測序檢測這些標簽所在的基因組區域，從而確定脫靶突變的位置。廣使用的細胞內檢測方法。能檢測低頻脫靶突變。Digenome-Seq，片段化的gDNA與CRISPR/RNP混合孵育，進行全基因組測序檢測脫靶。全基因組測序，直接檢測切割位點，能檢測低頻脫靶突變。脫靶檢測政策，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。基因療法脫靶檢測分析

Cas9蛋白是一種切割外來DNA的酶，像一把分子剪刀。該蛋白通常與兩個RNA分子結合：crRNA和另一個稱為tracrRNA（或“反式jihuocrRNA”）。這兩個RNA分子引導Cas9到它將進行切割的目標部位。這段DNA是與crRNA的20個核苷酸互補的。CRISPR技術是從細菌和古細菌的自然防御機制中改編而來的。這些生物體使用CRISPR衍生的RNA和各種Cas蛋白，包括Cas9，來阻止病毒和其他異物的攻擊。它們主要通過切碎和破壞外來入侵者的DNA來做到這一點。當這些組件被轉移到其他更復雜的生物體中時，它允許對基因進行操縱，或“編輯”。廣州基因編輯脫靶檢測安評預算允許的情況下，通過全基因組測序的方法進行全基因組序列的分析和比對更精細，如基于NGS的iGUIDE方法。

但是由于CHIP-seq實驗本身的難度較高，DISCOVER-seq這類方法的接受度并不高。3. 其他特殊方法CRISPR技術經過這么多年的發展，其應用已經不局限于造成DNA雙鏈斷裂，一些不要切割DNA雙鏈的CRISPR衍生技術（如堿基編輯、先導編輯和CRISPRi/a），可以在不引發隨機突變的情況下，對基因組進行精細編輯或者調控。這些技術所使用nCas9或dCas9只結合或者切割雙鏈中的一條鏈，之前的脫靶檢測方法都不能直接適用。這些CRISPR衍生技術中，CRISPR產生的脫靶可以被細分為兩個部分，其一是Cas9/sgRNA結合DNA導致的脫靶，這部分信息使用同樣序列的sgRNA進行野生型Cas9脫靶位點檢測能夠間接得到

采用基因編輯技術制備的細胞產品。對于采用基因編輯技術制備的基因修飾細胞產品，應進行體外在靶和脫靶活性評估，以確認修飾酶或向導RNA對靶基因序列的特異性。在評估基因編輯的脫靶風險時，應說明所選擇的評價策略的合理性和敏感性。雖然采用計算機分析預測基因編輯的潛在脫靶位點，并對潛在脫靶位點進行深度測序分析，可用于評估基因編輯的脫靶風險；但選擇的評價策略仍應包含體外全基因組測序比對，以證明潛在脫靶位點未出現脫靶。此外，在評估脫靶活性時，還應評估種屬特異性的差異、細胞病理生理狀態的差異或細胞類型的差異對非臨床數據預測性的影響。必要時，還應分析基因編輯對細胞表型和生理功能的潛在影響。脫靶檢測guide-sequence，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。

細胞經基因修飾后會改變其生物學特性，同時也會帶來新的安全性風險，如基因編輯脫靶風險、載體插入突變風險、載體重組風險、表達的轉基因產物的風險等。細胞經基因修飾后會改變其生物學特性，同時也會帶來新的安全性風險，如基因編輯脫靶風險、載體插入突變風險、載體重組風險、表達的轉基因產物的風險等。基于基因修飾細胞的產品種類繁多、各有特點，除上述一般技術要求外，還應基于產品的性進行相應的特殊考慮。本指導原則列舉了以下三種情形的特殊考慮。種子基因脫靶檢測，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。臺州crispr/cas9脫靶檢測分析

檢測脫靶效應比較好的方法:CIRCLE-seq。基因療法脫靶檢測分析

細胞外檢測方法：細胞外檢測方法較為直接，將基因組提純后進行CRISPR體外切割實驗，再捕獲發生脫靶切割的位點即可。1) Digenome-seqDigenome-seq是較早提出的一類細胞外脫靶位點檢測方法，提純的基因組DNA被Cas9/sgRNA切割后，再經過標準的全基因組測序流程獲得測序數據，之后需要較為復雜的生物信息學分析才能夠獲得CRISPR切割位點的信息。總體來講，這種方法測序成本較高，并且檢測靈敏度也有限。2)SITE-seq為了有效檢測到低頻脫靶位點，一般需要在建庫時定向捕獲CRISPR切割位點。SITE-seq就是這樣一種測序方法，提純的基因組DNA經過Cas9/sgRNA切割后，在切割位點末端連接帶Biotin的接頭；再隨機打斷基因組，在另一端連接第二個接頭；經過鏈霉親和素磁珠純化，只有一輪被Cas9切割的DNA才能夠被純化并測序，實現了CRISPR切割位點的富集。該方法雖然提高了脫靶位點的檢測靈敏度，但有著較高的實驗要求，每次需要投入大量的基因組DNA，并且無法區分提純基因組DNA時發生的隨機斷裂和Cas9的切割，導致產出較為明顯的背景信號。同時，由于一輪Biotin接頭只會接在Cas9切割位點的一側，導致測序結果里只能看到脫靶位點一側的序列。基因療法脫靶檢測分析