質粒載體的分類：按復制形式：分為嚴緊型和松弛型復制。根據質粒DNA復制與宿主之間的關系或在宿主細胞的拷貝數的多少，可以將質粒分為兩種不同的復制類型：嚴緊型和松弛型。嚴緊型質粒復制受宿主染色體DNA復制的嚴格控制，拷貝數較小一般只有1~3個拷貝。疏松型質粒的復制宿主的控制比較松，在宿主中的拷貝數比較多，一般有10~200個拷貝，有時可達到700個。按基因轉移性：分兩類：（1）傳遞性質粒：常為大型、嚴緊型質粒；（2）非傳遞性質粒：多為小型、松弛型質粒。按遺傳性狀、產物分類（1）kangshengs抗性：如氨芐西林、氯霉素抗性；（2）限制酶-修飾酶（R-M）系統：如hsdR-菌株可使DNA甲基化，但不限制外源DNA；hsd-菌株為限制和甲基化雙缺陷型。如何查到某個載體的拷貝數?江蘇載體拷貝數技術

ddPCR與qPCR在監測CART細胞拷貝數靈敏度比較，CAR-T細胞免疫zhiliao發展迅速，CAR-T細胞zhiliao后的動力學監測對患者隨訪至關重要，對指導接受CAR - T細胞zhiliao的患者的臨床決策也很重要。在給藥前，CAR - T細胞產品內的轉基因副本信息，如載體副本數量，對保證患者的安全性非常重要。然而，目前還缺乏開放區域定量檢測CAR - T細胞的實驗方法。一些機構已經建立了內部分析來監測CAR - T細胞頻率。2022年2月11日，MARIA?LUISA SCHUBERT等團隊在INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY 上發表了題為：Comparison of single copy gene?based duplex quantitative PCR and digital droplet PCR for monitoring of expansion of CD19?directed CAR T cells in treated patients的研究，將德國海德堡大學醫院建立的定量(q)PCR檢測方法，即基于單拷貝基因的qPCR與德國漢堡-埃彭多夫大學醫學中心建立的數字液滴PCR檢測方法進行了比較。這兩種方法都是duli開發的，能夠準確并定量比較CAR - T細胞頻率，并在臨床監測中起到重要作用。南京細胞療法載體拷貝數細胞產品中的外源病毒載體基因拷貝數不高于5拷貝/細胞。

關于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產品，例如轉座子元件、γ-逆轉錄病毒、慢病毒及其他逆轉錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉座子的載體在體外修飾的細胞，長期隨訪中需格外關注基因zhiliao產品的基因組整合風險，建議申辦方分析基因zhiliao載體在靶細胞或相關替代細胞的基因組中整合的影響如在優勢克隆、克隆性生長是否導致惡性。依據載體在靶細胞基因組中整合能力的不同，可分為非整合型、定點整合型、弱整合型、隨機整合型等不同類型。基因轉導與修飾的作用機制包括同源重組、非同源重組等。因此，需要根據多方面因素、針對不同類型產品的特性進行風險評估和控制。應通過綜合風險分析來論證產品開發的合理性和科學性，識別、確定與產品質量和安全性相關的風險因素； 確定非臨床和臨床研究期間所需進行風險評估的數據范圍和重點，并制定風險防控和處理措施。申請人需在整個產品生命周期內對其進行跟蹤分析和更新，收集數據以進一步確定其風險特征并制定控制策略。

數字PCR（DigitalPCR），數字PCR的基本原理是將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴，其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子，或者含有一個至數個待檢核酸靶分子，且每個微滴都作為一個單獨的PCR反應器。經PCR擴增后，采用微滴分析儀逐個對每個微滴進行檢測，有熒光信號的微滴判讀為1，沒有熒光信號的微滴判讀為0（因此該技術被稱為“數字PCR”），較終根據泊松分布原理以及陽性微滴的比例，分析軟件可計算給出待檢靶分子的濃度或拷貝數（無需標準曲線的繪制）。新型CAR/TCR T細胞臨床產品中載體拷貝數的定量—數字PCR法。

一般情況下重組載體基因較少整合到基因組中，但近年來已發現載體基因整合到特定基因座中導致的可能性。建議設計時充分考慮重組載體的安全性，關注目的基因的啟動子選擇、給藥劑量、整合區域等多種相關因素。建議對病毒載體進行全基因組測序。另外，也可將病毒載體轉導目標細胞后，對整合有載體序列的細胞基因組進行測序，說明載體骨架及目的基因序列的準確性。對于整合型載體還應考慮插入突變的風險，應對插入位點進行分析并說明對細胞存在的潛在的安全性影響，并對分析方法的合理性進行說明。慢病毒載體LV ， 基因載體拷貝數檢測服務，可聯系上海唯可。常州細胞療法載體拷貝數分析

載體拷貝數就是某種質粒在單個細菌中的數量。江蘇載體拷貝數技術

人工構建的質粒載體分類：高拷貝數的質粒載體，ColE1、pMB1派生質粒具有高拷貝數的特點。適合大量增殖克隆基因，或需要大量表達的基因產物。低拷貝數的質粒載體，由pSC101派生來的載體特點是分子量小的拷貝數。它有特殊的用途：當有些被克隆的基因的表達產物過多時會嚴重影響寄主菌的正常代謝活動，導致寄主菌的死亡時，就需要低拷貝的載體。失控的質粒載體，這是一類溫度敏感型復制控制質粒。如pBEU1、pBEU2。插入失活型克隆載體。載體的克隆位點位于其某一個選擇性標記基因內部。如pDF41、pDF42。正選擇的質粒載體，直接選擇轉化后的細胞。只有帶有選擇標記基因的轉化菌細胞才能在選擇培養基上生長。江蘇載體拷貝數技術