酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對分子質量和濃度檢測鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下,其腱性組織被水解成膠凍狀溶液,從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150μL滴在薄膜上,可形成液滴狀膠原蛋白凝膠(,其生物力學強度極差,一碰即散。將鼠尾膠原蛋白進行SDS-PAGE,結果顯示:Ⅰ型膠原蛋白原液在相對分子質量130000附近有明顯條帶,另一條帶的相對分子質量大于170000(圖2)。膠原蛋白濃度為1.8mg/mL。吸取礦化液倒入小培養皿中,將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中。礦化2、6d后,分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進行TEM和電子衍射觀察。開蓋在超凈臺上過夜晾干,也可以在室溫放置1小時后。杭州鼠尾膠原直銷價
鼠尾膠原實驗應用:鼠尾膠原在原代培養耳蝸血管紋邊緣細胞中的應用。目的:建立利用自制的鼠尾膠原培養大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果。結果:自制的鼠尾膠原能正常地培養出大鼠耳蝸邊緣細胞,細胞角蛋白18表達陽性,免疫組織化學結果和掃描電鏡證實所培養的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。結論:成功建立了利用自制鼠尾膠原培養大鼠耳蝸邊緣細胞的方法,并且制作簡便,成本低廉。無錫鄭州鼠尾膠原鼠尾膠原,是一種天然培養基,它具有促進體外培養細胞(特別是上皮細胞)貼壁的作用。
服用膠原蛋白的注意事項:1、大分子膠原蛋白進入人體后需要降解為小分子肽、氨基酸才能被人體吸收,真正有效吸收的成分并不多。2、這些食物多半脂肪含量較高,不適合經常食用。高熱量、高脂肪,尤其是油炸食物都容易產生自由基,加速老化。如果能少吃這一類食物,就等于減少了身體被自由基傷害的機會及皮膚出現黑斑、皺紋等的風險。3、孕婦是不能服用膠原蛋白產品,因膠原蛋白是19種氨基酸組成的,其中有幾種是不能被胎兒吸收的,容易引起第二特征過早的發育和成熟,不利于出生后的嬰兒成長和發育。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養器皿,培養一些在普通細胞培養器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠,模擬真實的生長環境,使細胞在三維環境中生長。1,在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上,pH左右時可形成具有一定強度的三維膠,檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內正常生長、PC-12細胞在三維膠表面正常生長。使用方法:1、細胞培養器皿的表面包被推薦濃度:1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應的培養器皿中。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養模式的成功建立。
鼠尾膠原醋酸溶解:1.將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2.建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發現該方法會導致丟失蛋白。3.稀釋一定數量的膠原溶液。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。5.從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細胞前用無菌的水漂洗。鼠尾型膠原構建與人類自體骨組織化學成分和分子結構相近的仿生骨材料。青島正規鼠尾膠原廠家直銷
膠原蛋白是一種蛋白質,能幫助連接皮膚,骨頭和肌腱等身體組織。杭州鼠尾膠原直銷價
膠原蛋白的提取方法:酶法提取:酶法提取是利用蛋白酶使膠原溶解,水解條件溫和,反應速率快,提取的膠原蛋白仍有完整的三股螺旋結構,蛋白純度高,理化性質穩定,且無環境污染。酶法提取常用的蛋白酶有:胃蛋白酶、胰蛋白酶或者復合酶。工藝可選擇一步法,即利用酶液直接提取;二步法,即先用酸或者堿進行初步提取,然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO預處理革屑,然后用堿性蛋白酶提取膠原的水解產物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶,再用堿性蛋白酶提取了2種不同的膠原水解產物。趙蒼碧等[2]采用胃蛋白酶和無花果蛋白酶消化法從牛腱中提取膠原蛋白,探討了酶和酶的加入量對提取結果的影響,給出了酶對膠原提取較佳工藝配比,酶與牛腱的質量比為0.1時效果較佳,而使用無花果蛋白酶時,0.01的配比較佳。杭州鼠尾膠原直銷價
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