細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。為什么要進行細胞凍存？連續培養的細胞系容易發生遺傳漂變，有限細胞系較終會發生衰老，所有培養的細胞都易受到微生物污染，即使運轉情況較好的實驗室也會遇到設備故障的問題。由于已建立的細胞系是一種寶貴資源，更換細胞系成本高昂，而且耗費時間，因此，十分有必要將細胞冷凍起來長期保存。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞存儲中對細胞凍存更有特殊要求。上海石家莊無血清細胞凍存液

隨著細胞治理以及細胞儲存產業發展，細胞凍存也面臨從科研應用走向產業轉化。凍存要求發生改變，因為凍存細胞要進行臨床應用，所以凍存液成分由原來血清變為無血清，無動物源成分，凍存液中使用的所有原料均應符合臨床或藥物需求。隨著細胞凍存數量增加，凍存流程簡化也成為必然趨勢，因此無血清非程序降溫凍存液應運而生。目前針對細胞治理領域，推出一款即用型的無血清細胞凍存液，這款產品是細胞凍存研究的革新，主要具有幾大特點，凍存液無血清成分、無需配制直接使用、無需程序降溫盒、不需分步降溫、即用型細胞凍存液。該款凍存液適用于臍帶、脂肪、等間充質干細胞，免疫細胞以及大多數細胞系凍存。同時該款所有成分均使用藥用級原料配制而成，完全適應細胞儲存，細胞治理以及科學研究等不同場景使用唐山無血清細胞凍存液直銷價無血清細胞凍存液存儲條件：為避免重復凍融過程可能導致的凍存液品質下降和性能降低。

無血清細胞凍存液凍存細胞實驗步驟：選擇凍存處于對數生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。1.按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中。2.按照培養細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數。（參考：5×105至5×106cells/ml）。3.取相當于所需細胞數的細胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min）。移去離心管中的上清液。4.加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中，使細胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻，制成細胞混合液。5.將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中。6.直接將含細胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱，長期冷凍保存。7.若研究者需要液氮保存時，可將完全凍結的凍存管（放入-80℃冰箱后至少一晝夜）移至-196℃液氮罐。

細胞凍存秘籍：1.在倒置相差顯微鏡上每隔幾分鐘檢查酶處理的進展情況。一旦細胞變圓，輕輕敲擊細胞瓶使其脫離塑料表面。加入5mL含血清的生長培養基滅活胰酶。可能需要劇烈的移液操作來使培養容器底部的剩余細胞脫落，或將細胞團塊分解成單細胞懸浮液。胰酶的去除或失活對于冷凍細胞至關重要。如果游離試劑不能直接滅活，可以通過下一步的離心去除。2.用15ml離心管收集細胞。取出樣本進行細胞計數，剩余的細胞懸液以約100×g離心5分鐘以獲得細胞沉淀。離心時，用細胞計數板對細胞進行計數。使用臺盼藍染液檢查細胞的活性。無血清細胞凍存液產品特色：各批產品之間有更高的產品質量一致性。

細胞凍存和復蘇的原則是：慢凍速融，這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑，會導致細胞內冰晶的產生，從而使細胞產生內源性的機械損傷，引起細胞內環境滲透壓，PH，電解質等的改變，進而促使細胞死亡。在過去的幾十年中，科研工作者將培養基、血清和DMSO按照一定的比例配制成凍存液，并配合手工使細胞從4℃，-20℃，-80℃到液氮中逐步轉移使其達到“慢凍”的效果。但這種自制的凍存液儲存時間一般比較短，不能滿足時間跨度大的實驗項目的需求。且這樣人力和時間成本大，人手操作的誤差和血清制品的批間差也給實驗結果帶來了不穩定性。血清批次、品質間差異導致凍存液的批次間差異。上海石家莊無血清細胞凍存液

無血清細胞凍存液：降低細胞外溶液的電解質濃度，減少陽離子進入細胞的數量。上海石家莊無血清細胞凍存液

細胞凍存注意事項：離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養瓶中進行培養，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除DMSO，去除死細胞，這個是標準流程，但對一般人來說，把握不好離心轉速和時間，轉的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉過了活細胞會受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜（DMSO），DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規的離心分裝的方法進行復蘇，結果無有異常。上海石家莊無血清細胞凍存液