無血清細胞凍存液:細胞凍存及復蘇是細胞培養技術中的重要技術,細胞凍存是細胞長期保存的重要手段。細胞凍存液,作為細胞凍存時必須使用的一種溶液,其作用是將需要凍存的細胞懸浮于凍存液,供給細胞生命代謝所必須的營養物質,同時可以防止或減少冷凍冰晶對細胞的損傷作用。在現有技術中,一般使用培養基、血清和二甲亞砜(DMSO)按照一定比例混合的方法來凍存細胞,DMSO用量為10%,過低的DMSO濃度會導致凍存效果欠佳,但高濃度的DMSO有較大毒性,會對細胞體造成傷害;且傳統凍存液配方中所使用的血清成本高,增加動物病原污染的可能性。此外,有研究表明長期與胎牛血清接觸的細胞會對溶液介質中的胎牛血清發生內吞,內吞胎牛血清后的間充質干細胞有可能發生某些蛋白表達的變化,應用于人體后可發生異種動物蛋白引起的免疫反應,不能直接用于臨床輸注。因此,利用含有血清的凍存液凍存的細胞會給臨床使用帶來一定的風險。無血清細胞凍存液產品特色:可直接存放于-80℃冰箱凍存,無需經過費時的程序降溫過程(省時、省錢)。開封正規無血清細胞凍存液銷售廠家
胞冷凍保存方法:選擇凍存處于對數生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。1.按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中。2.按照培養細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數。(參考:5×105至5×106cells/ml)。3.取相當于所需細胞數的細胞懸浮液量,置于離心管中,離心收集培養細胞(參考離心條件:1,000~2,000rpm,4℃,3~5min)。移去離心管中的上清液。4.加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中,使細胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻,制成細胞混合液。5.將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中。6.直接將含細胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱,長期冷凍保存。7.若研究者需要液氮保存時,可將完全凍結的凍存管(放入-80℃冰箱后至少一晝夜)移至-196℃液氮罐。開封正規無血清細胞凍存液銷售廠家無血清凍存液特性:不需回溫,完全即用型。
細胞凍存,我們應該注意哪些事項:1、液氮內的細胞凍存較長時間不要超過半年,凍存在液氮中的細胞應一段時間內進行更替。一個細胞系在培養一個月后,可復蘇一管新的細胞確保其質量沒有發生太大變化,傳代幾次后,再凍存留種。2、細胞復蘇時,為保證獲得較高的存活率和接種率,應盡可能的快速完成復蘇,以避免在升溫過程中細胞內部晶體的產生。書面介紹的復蘇溫度是37℃-42℃,但是本人在實際操作中發現40℃環境下復蘇效果較好。3.復蘇時使用的培養基和凍存時使用的培養基中的血清盡量保證同一批次。
細胞凍存:取出凍存管,注明細胞名稱,代數,日期。離心后,以無菌吸管吸棄上清,不要吸到底部的細胞沉淀。將細胞沉淀與凍存液充分混勻,根據計數結果,將細胞總數調節成細胞數量為5-10*105/ml為宜。將細胞凍存懸液分裝進細胞凍存管中,一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜。嚴密封口后,使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低1℃。或者,將裝有細胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中,然后將凍存盒置于–80℃條件下過夜。若無凍存盒及其他凍存裝置,可以先將凍存管置于4℃30min,再-20℃凍存1h直至完全冷凍,再轉移至-80℃冰箱過夜。第二天將已經冷凍的細胞轉移到液氮容器中,置于液氮上方的氣相空間中儲存細胞凍存是細胞培養技術中細胞進行保種并長期保存的常用方法。
無血清細胞凍存液,通用于人和各種動物細胞株。特別配方(主要成分為DMSO和氨基酸)具有有效提高細胞凍存活率和復蘇活力。不含動物來源性蛋白,能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細胞安全。既適用于一般培養細胞的凍存,也適用于無血清培養細胞和蛋白表達細胞的凍存。產品特色:不含動物源成分,病毒、霉菌和支原體等污染可能性低,各批產品之間有更高的產品質量一致性。成分明確,無批次差異。可直接存放于-80℃冰箱凍存,無需經過費時的程序降溫過程(省時、省力、省錢)。獨特配方有效提高細胞凍存存活率及復蘇率。即用型,無需現配,即開即用。通用型,適用于凍存各種細胞系,原代細胞。可微量,原位凍存,例如雜交瘤細胞的凍存,省時高效。存儲條件:儲存于4℃以下,質量保障期從產品的生產日期起,為期兩年。3個月以上沒有使用凍存液計劃時,盡可能-20℃冷凍保存。為避免重復凍融過程可能導致的凍存液品質下降和性能降低,推薦將產品分裝成小管后,再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存。即用型產品,4℃可穩定保存。鄭州無血清細胞凍存液服務電話
在凍存細胞時將細胞懸浮于凍存液中,可使冰點降低,提高細胞膜對水的通透性。開封正規無血清細胞凍存液銷售廠家
細胞凍存:就凍存細胞而言,為了防止細胞在溫度下降時產生胞內細微冰晶,其溫度的下降不能太快。標準的操作是每一分鐘下降一度。有以下三種建議:(1)優先推薦使用程控降溫儀。(2)其次,加有異丙醇的細胞凍存盒,基本上也可以保證每分鐘1℃左右的降溫速度;(3)還有一些普遍的簡易凍存方法。如4℃半小時,-20℃半小時,然后-80℃過夜,再放入液氮;用泡沫盒(裝15mL離心管的那種)加一個保鮮袋,直接放在-80℃凍存;也可以用紗布做成袋子,將細胞懸掛在液氮上方,隔天轉入液氮;在凍存管外面包上棉花,直接放在-80℃冰箱就能夠達到緩慢降溫的效果;有的時候如果確實比較緊急的話,向96孔凍存盒的內部加滿自來水,再將凍存管放置孔中,直接置于-80℃,這樣也能夠達到緩慢降溫的目的。開封正規無血清細胞凍存液銷售廠家