鈣離子在很多生理活動中都發揮著重要作用,除了在肌肉細胞收縮中扮演著重要的角色,鈣離子也是神經元活動的重要“風向標”之一:當神經元膜電位發生去極化,產生的動作電位傳導到神經元軸突末梢時,細胞膜上的電壓門控鈣離子通道打開,大量鈣離子內流,包含神經遞質的囊泡由突觸前膜釋放至后膜,下游神經元就得以接受到上游的信號。因此,鈣離子成像可以追蹤神經元動作電位,從而幫助我們了解神經元集群的活動,可以用于感知覺,學習記憶,社會性行為等各種各樣的研究中。鈣成像技術(calcium imaging)是指利用鈣離子指示劑或指示監測組織內鈣離子濃度的方法。南京神經細胞鈣成像nVoke2.0
包含鈣離子指示劑的細胞可以通過熒光顯微鏡(fluorescencemicroscope)觀測,然后通過CCD攝像機捕捉、記錄圖像。現在鈣成像技術主要在以下幾類神經科學研究方面有廣泛應用:1.記錄培養的神經元的活動。2.記錄腦片上神經元的活動。記錄神經元的活動。由于離體實驗本身的限制,現在越來越多的神經方面科學家傾向于做在體鈣成像實驗,希望能得到更準確且更能反應生理狀況的數據。得益于雙光子熒光顯微鏡的發展,現在在實驗動物處于huoti狀態下的鈣成像技術取得了飛速進展。4.記錄神經元樹突和樹突棘(spine)的活動。由于對于實驗精度的要求,有些科學家不僅只想記錄單個神經元的反應,他們還想更確切地知道神經元上哪些樹突和樹突棘參與了某個行為,也就是說他們需要在huoti條件下,對單根樹突以及某些spine進行鈣成像記錄實驗。由于雙光子熒光顯微鏡和GCaMP6基因編碼鈣離子指示劑的發展,現在,對樹突和樹突棘用鈣成像實驗進行記錄也成為了可能。南京神經細胞鈣成像nVoke2.0鈣成像系統具有單細胞分辨率的大視野的特征。
使用MPM對神經元進行鈣成像時,通過隨機訪問掃描—即激光束在整個視場上的任意選定點上進行快速掃描—可以只掃描感興趣的神經元,這樣不僅避免掃描到任何未標記的神經纖維,還可以優化激光束的掃描時間。隨機訪問掃描可以通過聲光偏轉器(AOD)來實現,其原理是將具有一個射頻信號的壓電傳感器粘在合適的晶體上,所產生的聲波引起周期性的折射率光柵,激光束通過光柵時發生衍射。通過射頻電信號調控聲波的強度和頻率從而可以改變衍射光的強度和方向,這樣使用1個AOD就可以實現一維橫向的任意點掃描,利用1對AOD,結合其他軸向掃描技術可實現3D的隨機訪問掃描。但是該技術對樣本的運動很敏感,易出現運動偽影。目前,快速光柵掃描即在FOV中進行逐行掃描,由于利用算法可以輕松解決運動偽影而被guangfan的使用。
對新環境的探索確保了生存和進化的適應性,這是通過根據經驗動態變化的探索性回合和逮捕來表達的。因此,調節探索性行為的神經環路應該參與經驗的整合,并利用它來選擇適當的行為輸出。通過空間探索分析,研究人員發現在之前動物被逮捕的地點,瞬間逮捕數隨著經驗的增加而增加。在自由探索的小鼠身上進行的Inscopix鈣成像顯示,基底外側杏仁核中有一個遺傳和投射定義的神經元群,在自我控制的行為停止期間是活躍的。這個合集是以經驗依賴的方式響應的,對這些神經元的nVoke閉環光遺傳操作表明,它們在探索過程中驅動經驗依賴的逮捕是充分和必要的。投影特異性成像和光遺傳學實驗顯示,這些yizhi是由投射到**杏仁核的基底外側杏仁核神經元影響的,揭示了杏仁核環路,該回路介導了熟悉部位的短暫阻止,但不影響回避或焦慮/恐懼樣行為。我們的鈣成像系統集成自動控制和精確計時的多模式輸入端口。
CaMPARI,一種能夠兼顧全局和微觀的新型鈣成像技術,包含CaMPARI以及CaMPARI2(第二代)。其原理在于,CaMPARI蛋白在正常狀態下會發出綠色熒光,而如果對這種蛋白同時使用高濃度鈣離子與紫外光處理,它就會不可逆、長久地轉變成另一種能發出紅色熒光的構象,即實現將瞬間的神經元活動變成長久的紅色熒光蛋白表達。研究人員通過轉基因技術將這種新型蛋白導入到實驗動物的神經系統中,然后用度的紫外光照射動物的大腦,通過檢查熒光,找到發紅色熒光的神經元,這些神經元即是在紫外光照射期間活躍的神經元。由于紫外光可以對著整個大腦進行照射,所以理論上,人們可以對全腦進行檢查。雙光子熒光顯微鏡的發展,使在實驗動物處于活動狀態下的鈣成像技術取得了飛速進展。熒光顯微鈣成像哪里有
鈣離子在很多生理活動中都發揮著重要作用。南京神經細胞鈣成像nVoke2.0
近年來出現了通過植入性的microscope或microlens進行freelymoving動物鈣成像的技術。如光纖成像法:使用一端帶有GRINlens的光纖連接顯微鏡和動物大腦,從特定腦區發出的熒光信號被光纖收集,然后通過相機成像。動物頭部只需植入GRINlens,方便活動,而且可以同時植入多個lens來觀察不同的腦區之間的聯系和相互作用。還有直接植入動物大腦的微型熒光顯微鏡,將GRINlens直接植入皮層下的海馬,下丘腦,丘腦等區域,可以監測深部腦區的神經元活動。這種微型顯微鏡的重量只有幾克,不會影響動物自由活動,可以提供800μm×600μm視野和1.50μm橫向分辨率。南京神經細胞鈣成像nVoke2.0
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