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高通量全自動膜片鉗電流鉗制

來源: 發布時間:2025-02-24

膜片鉗技術是一種用于研究生物細胞膜離子通道的實驗方法。它通過在細胞膜上形成小孔,從而對細胞膜的離子通道進行精確的電生理記錄和描述。在膜片鉗實驗中,研究人員通常會先將細胞膜上的脂質雙層通過特殊設備進行穿刺,形成一個小孔。然后,他們將一個玻璃微電極插入這個小孔中,以接觸并測量細胞膜內部的電位變化。這個玻璃微電極的端非常細,不會對細胞膜產生太大的干擾。通過膜片鉗技術,科學家可以精確地測量離子通道的活動,從而了解離子通道在細胞生理學中的作用。例如,他們可以測量離子通道在不同刺激下如何開啟或關閉,以及這些變化如何影響細胞的電活動和化學信號傳遞。此外,膜片鉗技術還可以用于研究和鑒定新的藥物靶點。通過觀察藥物對離子通道活動的影響,科學家可以評估新藥對特定疾病的zhi療潛力。總的來說,膜片鉗技術是一種非常有用的實驗方法,它為我們提供了深入研究細胞膜離子通道以及藥物作用機制的工具。膜電導測定的依據是電學中的歐姆定律。高通量全自動膜片鉗電流鉗制

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離子通道的近代觀念源于Hodgkin、Huxley、Katz等人在20世紀30—50年代的開創性研究。在1902年,Bernstein創造性地將Nernst的理論應用到生物膜上,提出了“膜學說”。他認為在靜息狀態下,細胞膜只對鉀離子具有通透性;而當細胞興奮的瞬間,膜的破裂使其喪失了選擇通透性,所有的離子都可以自由通過。Cole等人在1939年進行的高頻交變電流測量實驗表明,當動作電位被觸發時,雖然細胞的膜電導大為增加,但膜電容卻只略有下降,這個事實表明膜學說所宣稱的膜破裂的觀點是不可靠的。1949年Cole在玻璃微電極技術的基礎上發明了電壓鉗位(voltageclamptechnique)技術滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業團隊,7*59小時隨時人工在線咨詢.高通量全自動膜片鉗電流鉗制由于膜片鉗檢測的是PA級的微電流信號,因此需要特殊的放大器及模數轉換器。

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膜片鉗技術本質上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區別關鍵在于:①膜電位固定的方法不同;②電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數目不同。電壓鉗技術主要是通過保持細胞跨膜電位不變,并迅速控制其數值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發揮著其他技術不能替代的作用。該技術的主要缺陷是必須在細胞內插入兩個電極,對細胞損傷很大,在小細胞如元,就難以實現,又因細胞形態復雜,很難保持細胞膜各處生物特性的一致。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業團隊,7*49小時隨時人工在線咨詢.

1976年德國馬普生物物理化學研究所Neher和Sakmann在青蛙肌細胞上用雙電極鉗制膜電位的同時,記錄到ACh啟動的單通道離子電流,從而產生了膜片鉗技術。1980年Sigworth等在記錄電極內施加5-50cmH2O的負壓吸引,得到10-100GΩ的高阻封接(Giga-seal),明顯降低了記錄時的噪聲實現了單根電極既鉗制膜片電位又記錄單通道電流的突破。1981年Hamill和Neher等對該技術進行了改進,引進了膜片游離技術和全細胞記錄技術,從而使該技術更趨完善,具有1pA的電流靈敏度、1μm的空間分辨率和10μs的時間分辨率。1983年10月,《Single-ChannelRecording》一書問世,奠定了膜片鉗技術的里程碑。Sakmann和Neher也因其杰出的工作和突出貢獻,榮獲1991年諾貝爾醫學和生理學獎。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業團隊,7*48小時隨時人工在線咨詢.膜片鉗,為您的科研之路增添一雙慧眼!

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膜片鉗放大器的工作模式;(1)電壓鉗模式∶在鉗制細胞膜電位的基礎上改變膜電位,記錄離子通道電流的變化,記錄的是諸如通道電流;EPSC;IPSC等電流信號。是膜片鉗的基本工作模式.(2)屯流鉗素向細胞內注入刺激電流,記錄膜電位對刺激電流的反應。記錄的是諸如動作電位,EPSP;IPSP等電壓信號。膜片鉗技術實現膜電位固定的關鍵是在玻璃微電極前列邊緣與細胞膜之間形成高阻(10GΩ)密封,使電極前列開口處相接的細胞膜片與周圍環境在電學上隔離,并通過外加命令電壓鉗制膜電位。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業團隊,7*44小時隨時人工在線咨詢.離子通道的近代觀念源于Hodgkin、Huxley、Katz等人在20世紀30—50年代的開創性研究。進口單通道膜片鉗價格

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對電極持續施加一個1mV、10~50ms的階躍脈沖刺激,電極入水后電阻約4~6MΩ,此時在計算機屏幕顯示框中可看到測試脈沖產生的電流波形。開始時增益不宜設得太高,一般可在1~5mV/pA,以免放大器飽和。由于細胞外液與電極內液之間離子成分的差異造成了液結電位,故一般電極剛入水時測試波形基線并不在零線上,須首先將保持電壓設置為0mV,并調節“電極失調控制“使電極直流電流接近于零。用微操縱器使電極靠近細胞,當電極前列與細胞膜接觸時封接電阻指示Rm會有所上升,將電極稍向下壓,Rm指示會進一步上升。通過細塑料管向電極內稍加負壓,細胞膜特性良好時,Rm一般會在1min內快速上升,直至形成GΩ級的高阻抗封接。一般當Rm達到100MΩ左右時,電極前列施加輕微負電壓(-30~-10mV)有助于GΩ封接的形成。此時的現象是電流波形再次變得平坦,使電極超極化由-40到-90mV,有助于加速形成封接。為證實GΩ封接的形成,可以增加放大器的增益,從而可以觀察到除脈沖電壓的首尾兩端出現電容性脈沖前列電流之外,電流波形仍呈平坦狀。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業團隊,7*55小時隨時人工在線咨詢.高通量全自動膜片鉗電流鉗制

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