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Recombinant Mouse MASP2 Protein

來源: 發布時間:2024-09-24

EndoH糖苷內切酶H(EndoH)在實驗中通常用于分析以下類型的糖鏈:1.**高甘露糖型糖鏈**:EndoH能夠特異性地識別并切割高甘露糖型N-連接糖鏈,這些糖鏈通常存在于未成熟的糖蛋白中。2.**某些雜合型糖鏈**:EndoH也能對某些雜合型寡聚糖的殼二糖結構進行切割,去除糖蛋白中的N-連接高甘露糖。3.**N-連接糖鏈**:EndoH主要用于去除糖蛋白中的N-連接高甘露糖,這有助于研究糖鏈結構和糖基化模式。4.**抗體糖型分析**:在IgG中,Fc區Asn297處的保守N-連接糖對其活性至關重要,EndoH可用于分析這些糖鏈。5.**糖蛋白的糖基化模式**:EndoH有助于分析糖蛋白的糖基化位點、糖基化程度以及糖鏈的具體結構。6.**糖鏈分析和結構表征**:在糖鏈分析的主要策略中,EndoH作為高效、準確、穩定的去糖基化方法,有助于從糖蛋白上游離糖鏈,然后進行詳細的分析表征。EndoH的使用可以為研究者提供關于糖蛋白糖基化模式的重要信息,尤其是在抗體藥物研究和開發中,對于理解糖鏈如何影響藥物的活性、穩定性和免疫原性具有重要意義。

泛素蛋白是一種在真核細胞中存在的小分子蛋白質,由76個氨基酸殘基組成,具有高度的保守性。Recombinant Mouse MASP2 Protein,His Tag

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EndoS酶在抗體藥物偶聯物(ADCs)研究中的具體應用主要體現在糖鏈定點偶聯技術方面。根據上海藥物研究所的研究進展,EndoS酶被用于實現定點ADC化合物的“一步”制備,這是一種新穎的糖鏈定點ADC制備策略。該策略利用了新穎截短型糖結構的藥物-連接子和野生型糖苷內切酶EndoS2,將小分子細胞毒藥物直接定點連接到抗體糖基化位點,從而克服了傳統糖鏈定點ADC制備策略的限制。具體來說,研究人員通過篩選發現,EndoS2酶可以將二糖底物LacNAc轉移至去糖抗體N297位糖基化位點,并且LacNAc半乳糖6號位唾液酸化修飾不影響EndoS2的轉糖基化活性。這一發現使得EndoS2和LacNAc的組合可以直接實現野生型抗體的糖基化改造,且EndoS2對多樣化LacNAc修飾的兼容性,可以高效獲得多樣性功能修飾的巖藻糖化或去巖藻糖化的糖工程抗體。此外,研究人員還利用疊氮化修飾的LacNAc底物實現了抗體糖基化位點的“一步”疊氮化修飾,并通過點擊化學反應偶聯藥物-連接子,實現了“兩步”制備得到定點ADC化合物。

Recombinant Mouse ALK Protein,hFc Tag在基因編輯中,Pfu DNA Polymerase 可用于目的基因或編輯工具的克隆,減少克隆過程中的非目標突變。

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重組的化膿性鏈球菌Cas9蛋白(SpCas9)是一種用于基因組編輯的核酸酶。它是CRISPR-Cas系統的一部分,該系統是一種細菌和古菌的適應性免疫防御機制,能夠識別并切割入侵的外源核酸。Cas9蛋白在CRISPR系統中起到關鍵作用,它能夠識別特定的原間隔子相鄰基序(PAM),在引導RNA(gRNA)的引導下與目標DNA結合并進行切割。SpCas9蛋白由1053個氨基酸組成,相對較小的體積使其便于在體內遞送,因此它在多種生物中都能進行有效的基因組編輯。為了提高SpCas9的表達量和溶解度,研究人員采用了多種策略,例如使用GB1促溶標簽和多重啟動子策略,這些策略可以顯著提高蛋白的產量和活性,同時保持其功能活性不受影響。在基因編輯過程中,SpCas9與gRNA形成穩定的核糖核的蛋白(RNP)復合物,通過gRNA與基因組DNA的序列匹配來識別目標位點,并在距離NGGPAM序列3個堿基以內的位置切割DNA。為了增強SpCas9的基因組編輯效率,研究人員還開發了嵌合融合蛋白,例如與5’至3’核酸外切酶重組J(RecJ)或GFP融合的SpyCas9蛋白,這些嵌合蛋白可以顯著提高靶向基因編輯效率,同時保持較低的脫靶效應。

PNGaseF(肽-N-糖苷酶F,Peptide-N-glycosidaseF),也稱為N-糖酰胺酶F,是一種用于糖蛋白研究的酶,它可以從糖蛋白的N-連接糖鏈上去除糖基。以下是PNGaseF的一些關鍵特性和應用:1.**作用機制**:PNGaseF能夠特異性地切割位于天冬酰胺殘基上的N-連接糖鏈,釋放出未被糖基化的多肽部分和糖鏈。2.**應用領域**:PNGaseF在糖生物學和蛋白質組學研究中非常重要,用于分析糖蛋白的糖基化模式和結構。3.**酶的來源**:PNGaseF開始是從大腸桿菌(Escherichiacoli)中分離出來的,現在也可以通過重組DNA技術在其他宿主細胞中表達。4.**酶的純度和活性**:商業化的PNGaseF通常具有高純度和高比活性,確保了在實驗中的高效性和可重復性。5.**使用條件**:PNGaseF在溫和的條件下工作,通常在pH7.5至9.0之間,溫度在37°C左右。6.**穩定性**:PNGaseF在儲存時通常需要冷凍保存,以保持其活性。在適當的條件下,該酶可以保持穩定和活躍。7.**樣品準備**:在使用PNGaseF之前,糖蛋白樣品需要適當準備,可能包括純化和緩沖液交換,以確保反應條件的一致性。泛素蛋白的C末端通常通過酰胺鍵與靶蛋白的氨基團連接在一起,最常見的是與靶蛋白賴氨酸的ε氨基團相連。

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在進行IdeSProtease的分子改造時,平衡酶的活性和穩定性是一個關鍵的挑戰。以下是一些策略,這些策略可以幫助研究者在提高酶穩定性的同時保持或甚至提高其催化活性:1.**定向進化**:使用定向進化技術進行多輪的突變和篩選,以獲得在所需條件下具有改進穩定性的酶變體,同時監測其催化活性,確保改造后的酶保持高效催化能力。2.**結構基礎的理性設計**:基于IdeSProtease的三維結構信息,識別可能影響穩定性和活性的關鍵氨基酸殘基,通過點突變或小肽插入來優化這些區域。3.**計算模擬**:利用分子動力學模擬和計算化學方法預測突變對酶穩定性和活性的影響,以指導理性設計。4.**糖基化修飾**:通過糖基化可以增加酶的溶解性和穩定性,但需注意不要干擾酶的活性位點或底物結合位點。5.**活性位點附近的柔性區域改造**:通過剛化柔性區域的策略提高酶的熱穩定性,同時保持活性位點的柔性以維持催化活性。6.**長距離相互作用分析**:研究蛋白質內部的長距離相互作用,識別影響穩定性和活性的遠程突變,通過這些突變優化酶的性能。7.**酶活性和穩定性的權衡分析**:通過實驗數據,分析酶活性和穩定性之間的關系,找到比較好平衡點。泛素從E1轉移到泛素結合酶E2的活性位點半胱氨酸殘基上,形成E2-泛素硫酯中間體。腸激酶

Probe qPCR Mix (2×) 支持多重qPCR,即在單個反應中同時檢測多個靶標基因 。Recombinant Mouse MASP2 Protein,His Tag

IdeSProtease是一種免疫球蛋白G(IgG)特異性降解酶,它能夠在IgG的鉸鏈區下方的一個特定位點進行切割,產生F(ab')2和Fc片段。這種酶是通過大腸桿菌(E.coli)表達系統重組表達生產的,并且經過分子改造,使其具有更高的酶活和更廣的底物特異性。在生產過程中,確保IdeSProtease符合GMP(良好生產規范)標準,需要進行以下步驟:1.**分子改造**:通過分子生物學技術對IdeS進行改造,增強其穩定性和比活性。2.**大腸桿菌表達系統**:利用大腸桿菌表達系統進行IdeS的重組表達,確保無動物源性成分,減少病毒污染風險。3.**純化**:通過高度純化過程,確保IdeS的純度達到≥95%。4.**酶活定義**:1個酶活力單位定義為在37°C條件下,30分鐘內酶切1μg重組單克隆IgG所需的酶量。5.**質量控制**:每批產品都經過嚴格的質量控制,以確保產品批間穩定性和高穩定性。6.**儲存條件**:采用適當的儲存條件,如-30℃至-10℃凍存,確保產品在有效期內保持活性和穩定性。7.**微生物學安全性檢測**:進行無菌檢測、體內有毒物質的檢測、抗生物質殘留檢測、宿主細胞蛋白殘留檢測和病毒安全性檢測,確保產品符合微生物學安全性要求。

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