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Recombinant Human Nesfatin-1

來源: 發(fā)布時間:2024-09-24

重組人血清白蛋白(rHSA),特別是通過植物表達系統(tǒng)生產(chǎn)的細胞培養(yǎng)級產(chǎn)品,以其高純度和質(zhì)量一致性而受到科研和工業(yè)界的重視。以下是高純度rHSA的一些關(guān)鍵特點和意義:1.**純度標(biāo)準(zhǔn)**:高純度的rHSA通常意味著蛋白質(zhì)含量達到99%以上,這通常通過高效液相色譜(HPLC)、SDS-PAGE電泳等方法進行驗證。2.**內(nèi)素水平**:內(nèi)素水平是衡量蛋白質(zhì)純度的一個重要指標(biāo)。高純度rHSA的內(nèi)素水平通常非常低(例如,≤0.5EU/ml),這有助于減少細胞培養(yǎng)中潛在的內(nèi)素污染。3.**宿主細胞蛋白(HCP)殘留**:高純度rHSA的宿主細胞蛋白殘留量非常低,這有助于減少細胞培養(yǎng)中外來蛋白的干擾。4.**無動物源成分**:由于rHSA是通過植物表達系統(tǒng)生產(chǎn)的,因此不含有動物源性成分,這降低了動物源性疾病傳播的風(fēng)險。5.**批次一致性**:高純度rHSA的生產(chǎn)過程通常在嚴(yán)格控制的條件下進行,確保不同批次之間的質(zhì)量一致性,這對于科學(xué)研究和商業(yè)生產(chǎn)至關(guān)重要。6.**應(yīng)用廣**:高純度rHSA在細胞培養(yǎng)、生物制藥、藥物載體、疫苗開發(fā)等領(lǐng)域有著廣的應(yīng)用。7.**安全性**:高純度rHSA的生產(chǎn)過程不涉及動物源材料,因此可以降低血源性疾病的風(fēng)險,提高產(chǎn)品的安全性。泛素連接酶E3識別特定的靶蛋白,并促進E2上的泛素轉(zhuǎn)移到靶蛋白的賴氨酸殘基上,形成泛素化標(biāo)記。Recombinant Human Nesfatin-1

Recombinant Human Nesfatin-1,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

酵母重組表達的N-糖苷酶F(PNGaseF)是一種酰胺水解酶,具有以下特點:1.**高效性**:PNGaseF是去除幾乎所有N-連接寡糖從糖蛋白中有效的酶法方法。它能夠在幾分鐘內(nèi)快速且無偏倚地釋放所有的N-糖鏈,適合后續(xù)的色譜或質(zhì)譜分析。2.**重組酶**:該酶是重組的酰胺酶,能夠從高甘露糖、雜合和復(fù)雜寡糖中切割內(nèi)GlcNAc和天冬氨酸殘基之間的連接。3.**純度**:純度達到95%以上,通過SDS-PAGE和完整ESI-MS進行確定。4.**儲存穩(wěn)定性**:在含有50%甘油的儲存緩沖液中,好的活性和穩(wěn)定性可維持長達24個月。5.**使用條件**:可以在原生或變性條件下使用,對于變性條件下的去糖基化,建議添加NP-40以解除SDS的抑制作用。6.**比活性**:具有高達100000U/mL的比活性。7.**His標(biāo)簽**:產(chǎn)品帶有His標(biāo)簽,常用于抗體及其相關(guān)蛋白的完全去糖基化。8.儲存條件:-25~-15℃保存,有效期1年。9.**無甘油版本**:還提供了無甘油版本的PNGaseF,這有助于在HPLC和質(zhì)譜分析中獲得結(jié)果。10.**酶活定義**:1個酶活力單位指在10μL的反應(yīng)體系中,37℃條件下1小時從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。這些特點使得酵母重組表達的PNGaseF成為研究和分析糖蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)的重要工具。Recombinant Mouse GM-CSF ProteinUBE2L3在調(diào)節(jié)NF-κB信號通路中的作用可能對免疫反應(yīng)和炎癥過程至關(guān)重要。

Recombinant Human Nesfatin-1,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

EndoS糖苷內(nèi)切酶在ADCs制備中的具體應(yīng)用步驟,根據(jù)上海藥物研究所的研究,可以概括為以下幾個關(guān)鍵環(huán)節(jié):1.**篩選糖底物和糖苷內(nèi)切酶**:研究人員篩選了一系列糖底物和糖苷內(nèi)切酶,發(fā)現(xiàn)Endo-S2酶能夠?qū)⒍堑孜風(fēng)acNAc轉(zhuǎn)移至去糖抗體N297位糖基化位點,且LacNAc半乳糖6號位唾液酸化修飾不影響Endo-S2的轉(zhuǎn)糖基化活性。2.**抗體糖基化改造**:利用Endo-S2和LacNAc的組合,直接實現(xiàn)野生型抗體的糖基化改造。Endo-S2對多樣化LacNAc修飾的兼容性,可以高效獲得功能修飾的糖工程抗體。3.**設(shè)計合成藥物-連接子復(fù)合物**:研究人員設(shè)計并合成了LacNAc-linker-drug復(fù)合物結(jié)構(gòu),這是實現(xiàn)定點ADC化合物“一步”組裝的關(guān)鍵。4.**“一步”定點偶聯(lián)**:通過Endo-S2的催化作用,將小分子細胞毒藥物通過特定的糖鏈結(jié)構(gòu)直接定點連接到抗體的糖基化位點,簡化了ADCs的制備流程。5.**評價和測試**:對獲得的糖鏈定點ADC化合物進行結(jié)構(gòu)均一性、親水性、體外穩(wěn)定性及體外活性的測試。測試結(jié)果顯示,這些化合物具有非常好的結(jié)構(gòu)均一性(DAR=2)、親水性和體外穩(wěn)定性,并且在體外具有強大的抑制活性。

通過EndoS糖苷內(nèi)切酶S進行糖蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)分析通常涉及以下步驟:1.**樣本準(zhǔn)備**:首先,需要獲得糖蛋白的純化樣本,以確保分析的準(zhǔn)確性。2.**酶的準(zhǔn)備**:準(zhǔn)備適量的EndoS糖苷內(nèi)切酶S,根據(jù)實驗需要選擇合適的濃度和緩沖體系。3.**酶切反應(yīng)**:-將糖蛋白樣本與EndoS酶混合,在適宜的條件下(如pH、溫度等)進行酶切反應(yīng)。-反應(yīng)時間根據(jù)EndoS的活性和所需的切割程度來確定。4.**終止反應(yīng)**:在達到預(yù)期的酶切時間后,通過加熱或添加適當(dāng)?shù)木彌_液來終止酶切反應(yīng)。5.**分離純化**:-使用色譜技術(shù)(如凝膠滲透色譜、離子交換色譜等)將酶切后的糖蛋白和釋放的糖鏈分離。-純化過程可能需要多步色譜以確保糖鏈的純度。6.**糖鏈分析**:-對分離得到的糖鏈進行進一步的結(jié)構(gòu)分析,可能包括質(zhì)譜分析、核磁共振(NMR)波譜分析等。-可以使用高分辨率的質(zhì)譜技術(shù),如MALDI-TOF或ESI-MS,來確定糖鏈的精確質(zhì)量。7.**序列鑒定**:通過與已知糖鏈數(shù)據(jù)庫比對,確定糖鏈的序列和結(jié)構(gòu)。8.**功能分析**:研究酶切后的糖蛋白和釋放的糖鏈對生物活性的影響,如結(jié)合特性、免疫原性等。9.**數(shù)據(jù)分析**:收集所有數(shù)據(jù)并進行綜合分析,以揭示糖鏈結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。

Multiplex Probe qPCR Mix 已預(yù)混了低濃度ROX參比染料,適用于需要低濃度ROX校正的熒光定量PCR儀 。

Recombinant Human Nesfatin-1,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

NLS-Cas9Nuclease是一種重組的化膿性鏈球菌Cas9蛋白,它在N端和C端都添加了核定位信號(NLS),這使得它能夠更有效地進入細胞核并進行基因組編輯。這種蛋白與CRISPR/Cas9系統(tǒng)的引導(dǎo)RNA(gRNA)形成穩(wěn)定的核糖核的蛋白(RNP)復(fù)合物,可以在進入細胞后立即定位到細胞核,從而誘導(dǎo)特定的DNA雙鏈斷裂,實現(xiàn)基因編輯。與傳統(tǒng)的mRNA或質(zhì)粒系統(tǒng)相比,使用NLS-Cas9Nuclease不需要轉(zhuǎn)錄和翻譯過程,因此可以避免將外源DNA插入基因組的風(fēng)險,這對于基因編輯尤其有用。NLS-Cas9Nuclease的特點包括:1.無DNA:系統(tǒng)不添加外部DNA,降低了插入外源DNA的風(fēng)險。2.高切割效率:雙NLS確保Cas9蛋白高效進入細胞核。3.低脫靶效應(yīng):Cas9核酸酶的瞬時表達提高了切割的特異性。4.節(jié)省時間:無需轉(zhuǎn)錄和翻譯過程。這種核酸酶可以用于體外DNA切割篩選高效和特異性靶向gRNA,以及通過電穿孔或注射與特定gRNA結(jié)合時的體內(nèi)基因編輯。產(chǎn)品的保存條件通常是在-25~-15℃,有效期為一年。使用時,可以根據(jù)推薦的反應(yīng)體系進行體外DNA裂解實驗,并通過瓊脂糖凝膠電泳檢測消化效率。具體產(chǎn)品的詳細信息和應(yīng)用指南,可以參考金斯瑞生物科技有限公司、NEB、金斯瑞、YEASEN和Novoprotein等公司提供的資料。E1通常被認為是泛素化過程中的限速步驟,因為它涉及到泛素的激起和ATP的水解。Recombinant Human IL-4 R alpha/CD124 Protein,hFc Tag

由于Pfu DNA Polymerase 對引物的質(zhì)量要求較高,使用純度高的引物可以減少由于引物錯誤導(dǎo)致的非目標(biāo)突變。Recombinant Human Nesfatin-1

重組人血清白蛋白(rHSA)在藥物載體應(yīng)用中提高藥物穩(wěn)定性和靶向性的機制主要包括以下幾點:1.**延長半衰期**:通過與rHSA融合,可以延長藥物分子在體內(nèi)的循環(huán)時間。例如,阿必魯肽(Tanzeum)是GLP-1與HSA的融合蛋白,其半衰期可延長至5天,每周給藥一次即可。2.**提高穩(wěn)定性**:rHSA作為載體,可以保護藥物分子不受體內(nèi)酶解和其他降解因素的破壞,從而提高藥物的穩(wěn)定性。例如,F(xiàn)GF21與HSA融合后,其體外穩(wěn)定性升,抗胰蛋白酶降解能力和高溫條件下的穩(wěn)定性增加。3.**改善藥代動力學(xué)**:rHSA融合蛋白能夠改善藥物的藥代動力學(xué)特性,如改變藥物的分布和代謝,減少腎臟的損失,從而提高藥物在體內(nèi)的濃度和療效。4.**增強靶向性**:rHSA可以通過其天然的生物學(xué)特性,如與特定受體的結(jié)合,增強藥物對特定組織或細胞的靶向性。例如,rHSA可以通過其與FcRn受體的結(jié)合,實現(xiàn)對瘤組織的靶向性。5.**降低免疫原性**:rHSA作為一種內(nèi)源性蛋白質(zhì),具有較低的免疫原性,可以減少藥物引起的免疫反應(yīng),提高藥物的安全性和耐受性。Recombinant Human Nesfatin-1

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