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Recombinant Mouse GDF15 Protein

來源: 發布時間:2024-11-10

嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶I(BstDNAPolymeraseI)是一種熱穩定的酶,它在高溫下(55-65°C)仍然保持活性,這使得它在分子生物學實驗中非常有用,尤其是在需要高溫反應的實驗中,如熱循環擴增(PCR)。BstDNAPolymeraseI具有以下特性:1.**熱穩定性**:BstDNAPolymeraseI在高溫下具有較高的穩定性,適用于高溫反應的實驗,如PCR。2.**3'到5'外切酶活性**:這種酶具有3'到5'外切酶活性,能夠切除DNA末端上的非特異性引物和雜交DNA,使其成為等溫擴增應用的理想酶。3.**耐鹽性**:BstDNAPolymeraseI在高鹽條件下仍能保持穩定活性,這在一些特殊的PCR應用中非常有用。4.**等溫擴增**:由于其3'到5'外切酶活性,BstDNAPolymeraseI用于等溫擴增反應,如LAMP技術,這種技術能夠在恒溫下進行DNA擴增,無需繁瑣的溫度循環。5.**快速PCR**:由于其高溫穩定性,BstDNAPolymeraseI也可用于快速PCR反應,縮短了實驗時間。6.**高GC含量模板擴增**:BstDNAPolymeraseI對高GC含量模板的擴增效果較好,因此在一些難擴增的模板中表現出色。E1在ATP的存在下激發泛素分子,通過一個硫酯鍵將泛素的C末端甘氨酸殘基與E1酶的活性連接起來。Recombinant Mouse GDF15 Protein,hFc Tag

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BstDNA聚合酶在等溫擴增中的優勢主要包括以下幾點:1.**高靈敏度和擴增效率**:BstDNA聚合酶具有鏈置換能力,能夠在恒溫條件下快速、高效、特異性地擴增模板。翌圣生物的BstPlusDNAPolymerase靈敏度超高,低至5copies目的基因可測,且始終能比競品更快達到閾值,擴增速率更快。2.**高dUTP耐受性**:BstPlusDNAPolymerase具有較高的dUTP耐受性,在反應體系中添加dUTP對BstPlusDNAPolymerase的靈敏度及擴增效率無影響,這使得它在防污染系統中表現出色。3.**快速擴增**:使用BstDNA聚合酶的等溫擴增技術,如LAMP,可以在15-60分鐘內實現109-1010倍的擴增,顯示出快速的擴增能力。4.**熱穩定性**:BstDNA聚合酶具有較強的熱穩定性,能在60-65℃的恒溫條件下保持活性,這使得它非常適合于不需要溫度循環的等溫擴增技術。5.**簡化的反應設置**:Bst3.0DNAPolymerase優化了Loop-MediatedIsothermalDNAAmplification(LAMP)反應,簡化了反應設置,可以實現單酶RT-LAMP反應。6.**抗抑制劑能力強**:Bst3.0DNAPolymerase即使在高濃度的擴增抑制劑中,包括dUTP,也能展現出強大的性能。

Recombinant Human STAT4 Protein,His TagUBE2L3在調節NF-κB信號通路中的作用可能對免疫反應和炎癥過程至關重要。

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使用BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads(血液基因組DNA提取試劑盒,磁珠法)進行血液樣本中基因組DNA的提取,主要步驟如下:1.**實驗準備**:準備抗凝全血樣本(如EDTA抗凝血),移液器及無菌,15ml離心管,無水乙醇,70%乙醇,干凈的吸水紙,渦旋振蕩器,金屬浴/水浴,臺式離心機等。2.**樣本處理**:取適量血液樣本,根據試劑盒要求,可能需要將血液體積調整至特定量,例如200μl,并可能需要加入PBS緩沖液。3.**裂解血液細胞**:向血液樣本中加入蛋白酶K和細胞裂解液,渦旋混勻后,置于金屬浴或水浴中進行裂解,通常在65°C孵育10-15分鐘,并在此期間定期混勻。4.**DNA與磁珠結合**:向裂解后的樣本中加入異丙醇和磁珠懸浮液,渦旋混勻后,室溫放置一段時間,以便于基因組DNA與磁珠結合。5.**磁珠分離**:將樣本置于磁力架上,待磁珠聚集后,小心移除上清液,去除雜質。6.**洗滌磁珠**:向磁珠中加入漂洗液和洗滌液,進行洗滌以去除殘留的蛋白質和鹽分,然后再次使用磁力架分離磁珠,移除洗滌液。

BstDNAPolymerase,LargeFragment(嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶大片段)是一種經過改造的酶,它來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus)DNA聚合酶I,通過重組技術在大腸桿菌中表達并純化獲得。這種酶具有5'→3'的DNA聚合酶活性,但不具有5'→3'的核酸外切酶活性,因此它在等溫擴增反應中非常有用,如環介導的等溫擴增(LAMP)和滾環擴增(RCA)等。以下是BstDNAPolymerase,LargeFragment的一些關鍵特點和應用:1.**等溫擴增**:BstDNAPolymerase,LargeFragment具有很強的鏈置換能力,適用于多種等溫擴增反應,這些反應通常在50-68°C之間進行,比較好反應溫度為65°C。2.**快速測序**:由于其高聚合酶活性,BstDNAPolymerase,LargeFragment可以用于快速測序,特別是對于高GC含量的DNA模板或微量(納克量級)DNA模板的測序。3.**全基因組擴增**:BstDNAPolymerase,LargeFragment也可用于全基因組擴增(WGA),這是一種在不需要熱循環儀的情況下擴增整個基因組DNA的技術。4.**高dUTP耐受性**:與BstDNAPolymerase2.0相比,BstDNAPolymerase,LargeFragment在進行等溫擴增時不具有將dUTP摻入合成的DNA鏈的能力,這使得它在某些應用中更具優勢。Ultra-Long Master Mix 在分子生物學實驗中的應用主要集中在需要擴增長片段DNA序列的場合。

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確保Cre重組酶只作用于特定細胞,主要通過以下幾種方式實現:1.**組織特異性啟動子**:-利用組織特異性啟動子控制Cre重組酶的表達,可以確保Cre酶只在特定組織或細胞中表達。這種方法通過將Cre基因置于特定細胞類型特有的啟動子控制之下,實現對Cre酶表達的精確控制。2.**誘導型Cre重組酶系統**:-通過使用Cre-ERT(雌素受體突變體與Cre重組酶的融合蛋白),可以實現對Cre活性的時間控制。在無他莫昔芬誘導時,Cre-ERT與熱激蛋白Hsp90結合,定位于細胞質中;當他莫昔芬給藥誘導時,Hsp90脫離Cre-ERT,使Cre-ERT進入細胞核發揮基因重組的作用。這種系統相當于為Cre-Lox系統加裝了一個由他莫昔芬控制的外源開關,使得體內基因編輯更具時空靈活性。3.**藥物誘導的Cre系統**:-例如Tet-on系統,通過四環素或其衍生物多西環素的添加來激起基因表達。在三重轉基因動物中,rtTA在特定啟動子的控制下表達,多西環素與rtTA結合,Cre的表達,導致固定的報告基因重組。4.**AAV遞送Cre**:-利用包含組織特異性啟動子的腺相關病毒(AAV)載體可以選擇性地將Cre重組酶遞送至特定細胞。


泛素連接酶E3識別特定的靶蛋白,并促進E2上的泛素轉移到靶蛋白的賴氨酸殘基上,形成泛素化標記。Recombinant Mouse FcRH5/FcRL5 Protein,His Tag

去泛素化酶(Deubiquitinating enzymes, DUBs)可以去除泛素化蛋白上的泛素鏈,使泛素分子得以回收和再利用。Recombinant Mouse GDF15 Protein,hFc Tag

牛痘DNA拓撲異構酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)在實驗室中的使用主要涉及以下幾個步驟:1.**DNA載體連接**:-牛痘DNA拓撲異構酶I可以用于DNA載體連接,特別是在TOPO克隆載體制備中。它能夠識別并切割雙鏈DNA末端[5’C(T)CCTT],并與DNA形成共價連接形成穩定復合物,遇到DNA的5’-OH基團后,重新連接形成完整DNA鏈。2.**接頭連接**:-在NGS建庫中,牛痘DNA拓撲異構酶I可用于接頭連接。這包括將含有特定序列的接頭A和接頭B與酶一起孵育,以實現DNA片段的連接。3.**操作步驟**:-**質粒解旋**:將超螺旋質粒DNA與牛痘DNA拓撲異構酶I混合,在37°C下孵育5-15分鐘,以實現質粒的解旋。-**接頭連接**:將接頭A(含CCCTT序列)和接頭B(含5’OH)與牛痘DNA拓撲異構酶I混合,在37°C下孵育5-15分鐘,以實現接頭的連接。4.**注意事項**:-雙鏈接頭A通常5’端做NH2封閉修飾,以防止自連接;接頭A的CCCTT后通常包含5-12bp尾巴,再長的尾巴會導致連接效率大幅下降。-雙鏈接頭B的5’端必須包含-OH。-由于該酶應用廣,在不同的實驗中使用策略不同,需要靈活運用,并根據具體文獻進行調整。


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