外泌體是直徑為30-150nm的小細胞外囊泡。在生理和病理條件下，幾乎所有類型的細胞都可以釋放外泌體，在細胞通訊和表觀遺傳調控中發揮重要作用。外泌體天然存在于體液中，包括血液，唾液，尿液和腦脊液等，內部含有其來源細胞的核酸，蛋白等物質，因此基于外泌體的疾病診斷和治著方法得到了深入的研究。但是如何拿到純凈的外泌體一直是外泌體研究所面臨的難題之一，因此研究人員也開發了許多外泌體分離的方法，來一起看一下吧。差速離心法：離心力從300×g到100,000×g的下進行多次循環離心，較后收集外泌體顆粒。密度梯度離心法：等密度梯度超速離心法是通過從下到上逐步降低密度分層。動區梯度超速離心法由兩個梯度介質部分組成，樣品根據密度/質量/大小被依次分離。外泌體作為一種重要的細胞通訊方式，在生物學和醫學研究中具有普遍的應用前景。佛山尿液外泌體分離制造商

分離外泌體的方法之密度梯度超速離心：有助于根據尺寸、結構和形態差異分離和分析納米級材料。DGUC“細化”分離的囊泡，并使用密度為1.07g/mL或更低的密度梯度培養基。水中碘沙醇、冰冷的PBS和蔗糖是用于外泌體分離的常見梯度培養基。有市售的碘沙醇密度梯度分餾膜，用于將外泌體與非囊泡成分分離。將生物懸浮液添加到梯度培養基中，并以完整的梯度分層組分。DGUC有助于分離具有相同梯度的樣品。凋亡小體、蛋白質聚集體和其他非外泌體微囊泡可能通過超速離心干擾較終分離的外泌體產物。DGUC有助于克服超速離心的局限性，并提供較純凈的外泌體。DGUC在精細化和高性能外泌體分離方法中的應用。簡而言之，在分離細胞碎片后，應用1×105g用60%碘沙醇離心3小時，然后用1×10離心5用40%碘沙醇g18小時有助于形成多達12個碘沙醇梯度級分和兩個外泌體級分。超速離心使用連續的密度梯度或逐步梯度來較小化這些顆粒材料對外泌體的干擾。南昌外泌體分離公司外泌體通過它們攜帶的間質基質組分，在宿主細胞中誘導上皮間質轉化等重要的生物學反應。

對于外泌體的標記和鑒定，獲得外泌體之后，如何對其進行鑒定又是一個困擾研究者的問題。國際細胞外囊泡學會(ISEV)在2014年提議，對于分離獲得的外泌體需要從三個層面進行鑒定：WB檢測外泌體標志蛋白表達情況：外泌體膜上富含參與外泌體運輸的跨膜蛋白家族(CD63/CD81/CD9)、熱休克蛋白家族(HSP60/HSP70/HSPA5/CCT2/HSP90)和一些細胞特異性蛋白。其中CD63/TSG101是較常用到的外泌體標志物。TEM鑒定外泌體形態：電鏡具有較高的分辨率，可以直接觀察到樣品中外泌體的形態。NTA檢測外泌體粒徑及濃度：TEM可以觀察外泌體的形態學特征，但無法體現樣本中所有外泌體的粒徑分布情況及整體濃度。NTA(NanoparticleTrackingAnalysis)技術可快速準確地分析外泌體的粒徑分布及濃度，為外泌體鑒定提供有力證據。

外泌體的表征方法之光學方法：目前，光學方法是外泌體表征的主要方法，即動態光散射(DLS)、多角度光散射(MALS)和納米粒子跟蹤分析(NTA)。這些方法允許對尺寸（DLS0.5–200nm；MALS10–500nm；NTA10–1000nm）、尺寸分布和濃度進行高分辨率測量。DLS和MALS的結合增加了測量范圍(0.5–500nm)和精度。光學方法比較受歡迎的，但缺點是靈敏度低、試劑消耗高以及需要昂貴的設備。在使用納米粒子跟蹤分析NTA方法過程中，熒光染料的加入也提高了分辨率，并允許通過使用熒光標記來表征表面免疫表型。從而確定標記物存在。外泌體通過調節免疫系統和疙瘩微環境，在疙瘩免疫治著中的作用日益受到關注。

外泌體分離方法之基于聚合物的沉淀法：基于聚合物的沉淀技術通常包括將生物流體與含聚合物的沉淀溶液混合、4℃孵育和低速離心。用于基于聚合物的沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。這種聚合物的沉淀可以對分離的外泌體產生溫和影響而且可以產生中性的pH值。由此，出現了幾種常見的外泌體試劑盒：比如：SystemBiosciences,MountainView,CA,ExoQuick等。研究表明，使用ExoQuick方法可以快速執行，無需額外設備，只需用高速離心機進行超速離心可以獲得高產量的外泌體。但是此方法的缺點是：非外泌體材料對外泌體分離物的污染仍然是基于聚合物的分離方法的一個問題。此外，分離物中的聚合物可能會干擾下游分析。外泌體攜帶的小分子物質（如ATP、GTP等）參與細胞生命活動、代謝、細胞生長和分化等生物學進程。成都腦脊液外泌體制造商

外泌體可通過特定的組裝和功能修飾，提高其對宿主細胞的選擇性靶向性。佛山尿液外泌體分離制造商

分離外泌體的方法之超濾：它使用孔徑為50-450nm的膜過濾器從細胞碎片和較大的EV中分離外泌體。通過使用納米尺寸的濾膜，可以分離出目標尺寸的外泌體。超濾法通常用作超速離心的后續步驟，以及凝膠過濾和色譜的較后一步。超濾可以通過切向流過濾（TFF）或直流過濾（DFF）方法進行處理。DFF方法也稱為死端過濾，存在膜污染和顆粒分離受損的問題。此外，DFF只適用于小體積樣品，例如高達30mL的樣品。TFF也稱為錯流過濾是一種更快速、高效和方便的分離大規模外泌體體積的過程，TFF是樣品流體切向流過濾膜并避免形成濾餅或堵塞的過程。佛山尿液外泌體分離制造商

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