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合肥組織提取外泌體分離蛋白檢測

來源: 發布時間:2023-04-01

外泌體的表征分析:動態光散射:使用Anton-PaarLightsizer500粒子分析儀測定外泌體制劑中的粒度分布。動態光散射測量由于溶液中粒子的布朗運動引起的散射光強度的動態波動,(685nm的激光,檢測角度為15、90、175度);較小的粒子比較大的粒子移動得更快。確定顆粒大小時,通常使用三種分布類型:(1)數量分布,報告不同大小“箱”中的顆粒數量;(2)體積分布報告不同尺寸類別的顆粒總體積;(3)強度分布,報告不同大小顆粒散射的光。也可以使用高分辨率納米粒徑分析儀NanocoulterⅠ來分析樣品中每種大小的囊泡的實際數量、濃度及粒子動態、Zeta電位等。為了進行分析,將先前儲存在-20°C的75μl等分試樣的外泌體制劑用925μlPBS稀釋(得到1ml)并轉移到一次性比色皿中用于DLS測量。外泌體可通過血液或其他體液傳播,從而在遠離原發灶的部位誘導細胞生長和轉移。合肥組織提取外泌體分離蛋白檢測

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進行下一步的實驗。二是PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態完整,純度較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養和體內注射。2016.9《ScientificReports》雜志發表了該方法較新數據,表明PS法可提取相當高純度的外泌體。合肥尿液外泌體報價表外泌體與神經系統的關系復雜,通過在神經元間的轉移,參與多種神經疾病的發生和病理機制的形成。

差速離心法分離外泌體的實驗原理:外泌體是一種小的(40-100nm)細胞外膜囊泡,目前進行外泌體分離的普遍方法是差速離心法。應用差速離心法和粒徑分析等是細胞外囊泡(EV)研究的重要步驟。已知細胞會分泌許多膜囊泡,這些囊泡的大小、分子含量及其形成機制各不相同具體取決于細胞的類型和當前狀態。通常可以辨別出三個主要的EV群體:凋亡小體、脫落的囊泡和外泌體.凋亡小體是已知較大的囊泡,直徑為800-5000nm,由凋亡后細胞的細胞質和質膜成分組成。脫落的囊泡和外泌體由非凋亡細胞釋放。脫落的囊泡,也稱為“胞外體”或有時稱為“微泡”,是由質膜起泡產生的,一般的粒徑尺寸范圍為(50–1000nm)。

差速離心法分離外泌體的實驗原理:離心管內粒子的速度,由三種力(離心力、阿基米德浮力和斯托克斯粘性阻力)的平衡決定,如:其中geff為離心力(加速度),R為旋轉半徑,即粒子距旋轉軸的距離,ω為旋轉角頻率,d為粒子直徑,ρ為質量粒子的密度和ρsolv和η分別是介質的密度和粘度。在固定的離心條件(轉速和介質成分)下,粒子速度完全由粒子的形態和密度決定。密度高于介質密度的粒子沿離心力“向下”運動,而比介質輕的粒子沿與離心力相反的方向“上浮”。對于相似的密度,較大的粒子遷移得更快。因此,在生物學中,離心主要用于按大小(差速和速率區帶離心)或按密度(等密度離心)分離不同的物體。在這項研究中,我們專注于使用差速離心按大小進行顆粒分級。優化外泌體分離方法可以提高分離效率和分離精度。

人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而打開細胞內的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA。外泌體分離的方法會影響外泌體樣品的質量和數量。寧波血液RNA外泌體

部分外泌體分離方法可能存在對外泌體結構和元素的影響。合肥組織提取外泌體分離蛋白檢測

分離外泌體的方法之微流控分離:基于微流體的外泌體分離可以包括用于外泌體捕獲的免疫親和方法,納米多孔膜篩分方法或微柱上的納米線用于外泌體捕獲。所有三個系統都需要具有粘彈性分析和電操作的芯片才能進行外泌體分離過程。外泌體的特異性很高,采用基于微流控芯片的免疫親和捕獲方法。尺寸范圍在40-100nm之間的外泌體被這種微流體芯片特異性地捕獲,在外泌體分離和定量方面的益處。篩分方法可用于通過壓力或通過電泳從全血中過濾外泌體,壓力的利用使分離時間更短,電場導致高外泌體純度。特異性、可重復性、低分離時間和更低的分離成本是基于微流體的外泌體分離的一些優點。合肥組織提取外泌體分離蛋白檢測

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