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來源: 發布時間:2023-04-02

外泌體分離方法之篩分分離法:該技術是通過膜從生物液體中篩分外泌體并通過壓力或電泳進行過濾來分離外泌體。篩分分離法的分離時間較短,但分離的外泌體純度卻處于較高的水平。篩分分離法的缺點在于分離的外泌體回收率較低。總之,細胞外泌體提取、外泌體分離在疙瘩等研究領域發揮著重要作用。細胞外泌體分離方法目前多數還是采用高速離心機進行離心分離的技術方法,然而,其他幾種分離技術,如過濾法、免疫分離法和篩分法,雖然也能進行外泌體分離,但每種方法都有其局限性,多數還是只應用于實驗室、科學研究等領域。分離過程中避免對外泌體結構和功能造成影響至關重要。合肥上清外泌體報價表

外泌體分離方法優缺點對比:差速離心法:差速離心法仍是實驗中常用的外泌體分離技術。主要步驟如下:1.使用離心機低速離心來去除細胞與細胞碎片。2.而后增加轉速通過離心來消除樣本中較大的細胞囊泡。3.再使用高速離心機進行高速離心,通過離心沉淀的方式提取外泌體。在這里,需要注意的是生物流體的粘度與分離的外泌體的純度有較強的相關性。所以,對于高粘度的生物樣品需要超速離心機進行較長時間的離心操作。外泌體分離方法之免疫分離法:免疫芯片方法基于表面外泌體受體,用于根據來源分離外泌體。獲得的外泌體可直接分析或用于DNA或總RNA分離。外泌體胞內蛋白可用作分離外泌體的特異性標志物。此外,基于ELISA的ExoTEST也可以用于有效分離外泌體。其原理是:使用涂有外泌體抗體的ExoTEST板,可以從各種生物體液中分離出外泌體。該方法適用于常見和細胞類型特異性外泌體蛋白的檢測、分析和定量。青島腦脊液外泌體生產商超高速離心是常用的外泌體分離方法之一。

外泌體分離方法之密度梯度離心法:這種方法將超速離心機的超速離心與蔗糖密度梯度相結合。具體地說,密度梯度離心用于將外泌體與非囊泡顆粒(例如蛋白質和蛋白質/RNA聚集體)分離。因此,該方法將囊泡與不同密度的顆粒分離。足夠的離心時間比較重要,否則如果外泌體部分具有相似的密度,則仍可能在外泌體部分中發現污染顆粒。該結構不會讓大于1μm的細胞和其他顆粒進入布線區域。一些較小的顆粒和細胞碎片可以進入微柱區域,但被納米纖毛排除,形成直徑為30-200nm的孔。纖毛結構選擇性地捕獲外泌體和小細胞外囊泡。

外泌體的表征方法之非光學方法:非光學方法主要包括掃描電子顯微鏡(SEM)、透射電子顯微鏡(TEM)、冷凍電子顯微鏡(Cryo-EM)、原子力顯微鏡(AFM)、免疫檢測方法(ELISA)、傅立葉變換紅外光譜(FTIR)、可調諧電阻脈沖傳感(TRPS)和單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)。SEM、TEM和AFM方法通常用于直接膜結構和形態測定,而ELISA檢測提供各種結構顆粒(主要是蛋白質和受體)的檢測和量化,例如,用于外泌體形態的確認。單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)也用于外泌體定量,但也可用于檢測特定標記物和確定外泌體亞群。外泌體的分析需要根據不同來源的細胞選擇適宜的分離方法。

通過對外泌體以及外泌體提取相關生物試劑的研究發現:外泌體除了蛋白質,外泌體還含有RNA。外泌體miRNA可用于各種疙瘩的判斷。目前有八種miRNA被確定為卵巢病的標志物。此外,據報道,肺腺病者的血清和疙瘩樣本中的miRNA會增加。前列腺病的血清中外泌體miRNAmiR-141和miR-375水平會升高。研究表明,外泌體miRNA-21的血清水平升高和miRNA-1246在ESCC群體中凸現。有趣的是,外泌體miRNA可能是腎纖維化和心血管癥的潛在判斷標志物。對于進行型退行型疾病,在阿爾茨海默者的生物體液中發現了幾種miRNA,如:miR-9、miR-107、miRNA-128、miRNA134和miRNA-137miRNA124的高表達水平。外泌體與細胞死亡形式相關,可以參與凋亡和壞死細胞的清理和處理過程。青島腦脊液外泌體生產商

外泌體受到多種因素的調控,例如細胞膜電位、氧化應激和信號轉導途徑等。合肥上清外泌體報價表

外泌體還參與神經退行型癥。在神經退行型癥個體的腦脊液和外周血中已檢測到幾種特定于阿爾茨海默氏癥、帕金森氏癥和Creutzfeldt-Jakob的聚集蛋白。特別是,在從阿爾茨海默者的腦脊液樣本中獲得的外泌體中檢測到Thr-181磷酸化的tau。在Thr-181磷酸化的Tau是阿爾茨海默的既定生物標志物。此外,α-突觸核的蛋白也常在阿爾茨海默者的群體中檢出。此外,在尿液中發現的外泌體標志物也可以是膀胱和前列腺疙瘩的標志物。比如:視黃酸誘導蛋白3(GPRC5A)、抵抗素、外泌體蛋白PCA-3、TMPRSS2:ERG、α1-抗胰蛋白酶、組蛋白H2B1等。除了腦和泌尿道疙瘩外,外泌體蛋白也可以是胰腺病的標志物。比如:結直腸病的外泌體蛋白標志物包括EpCAM、cadherin-17、粘蛋白13(MUC-13)、角蛋白18、claudins和ephrinB1。合肥上清外泌體報價表

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