外泌體分離方法之過濾法：超濾膜也可用于外泌體的分離。根據微泡的大小，使用超濾膜過濾的方法可以將外泌體與蛋白質和其他大分子分離。外泌體也可以通過多孔結構捕獲它們來分離。常見的過濾膜孔徑為0.8m、0.45m或0.22m，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體。比如微柱多孔硅纖毛結構一般用于分離40-100nm外泌體。在初始步驟中，去除較大的囊泡。在接下來的步驟中，外泌體會群集中在過濾膜上。隔離步驟相對較短，但該方法需要用PBS緩沖液對硅結構進行預孵育。除標準過濾技術外，切向流過濾在有效分離外泌體方面也有著嘗試應用，通過切向流過濾技術去除游離肽和其他小化合物從而分離具有確定大小的外泌體。此外，在體外研究和脂肪組織中，也會采用超濾與SEC的結合的方式來分離外泌體。通過(a)對片上過濾器施加壓力或(b)產生電場，迫使外泌體穿過多孔膜，結合錯流和電泳分選來完成篩分。外泌體攜帶的小分子物質（如ATP、GTP等）參與細胞生命活動、代謝、細胞生長和分化等生物學進程。昆明外泌體測序

使用差速離心法分離外泌體主要需要注意的是轉子的選擇。“擺動桶”(SW)轉子和“定角”(FA)轉子，這些轉子的幾何形狀根本不同，因此沉降特性也不同。這些轉子之間的主要區別在于：FA轉子，與旋轉半徑相比，沉積顆粒的較大路徑長度通常較小，允許近似恒定遷移率并簡化描述。然而，第二個區別是圓形FA管的水平橫截面是橢圓形的，不同粒子的路徑長度根據軌跡與橢圓長軸的距離而不同。由于較短的路徑長度，外面顆粒可能沉降得更快，需要根據不同的實驗需要進行選擇。濟南細胞外泌體分離穩定性好外泌體的純化可以通過單顆粒色譜等技術實現。

分離外泌體的方法之過濾：過濾方法只取決于分子量或組分的大小，并有助于獲得較佳的外泌體產量。超濾、凝膠過濾和靜水透析包含在外泌體分離的過濾原理下。外泌體可以根據其定義的分子量或體積排阻限，使用標準膜過濾器從其他EV組分和細胞碎片中分離出來。市售的聚偏二乙烯碳酸酯膜過濾器具有各種孔徑范圍，用于滲透、納濾和微濾應用。分離外泌體的方法之體積排阻色譜（SEC）：該方法主要有助于從分離的外泌體中去除蛋白質和脂蛋白雜質，它已被用于從尿液和血漿蛋白中分離外泌體。它被用作超速離心和超濾的后續分離方法。瓊脂糖2B/CL4B、qEV和瓊脂丙烯酸S-400是通常用于凝膠過濾色譜分離外泌體的色譜柱。SEC可以在低壓下進行，這有助于分離具有完整完整性的外泌體。

外泌體分離方法之基于聚合物的沉淀法：基于聚合物的沉淀技術通常包括將生物流體與含聚合物的沉淀溶液混合、4℃孵育和低速離心。用于基于聚合物的沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。這種聚合物的沉淀可以對分離的外泌體產生溫和影響而且可以產生中性的pH值。由此，出現了幾種常見的外泌體試劑盒：比如：SystemBiosciences,MountainView,CA,ExoQuick等。研究表明，使用ExoQuick方法可以快速執行，無需額外設備，只需用高速離心機進行超速離心可以獲得高產量的外泌體。但是此方法的缺點是：非外泌體材料對外泌體分離物的污染仍然是基于聚合物的分離方法的一個問題。此外，分離物中的聚合物可能會干擾下游分析。外泌體的轉移涉及細胞因子、基質降解酶和細胞外基質重塑等多種調節步驟。

差速離心法分離外泌體的實驗原理：任何外泌體分離方案旨在獲得產量合理且不受細胞碎片、細胞器和凋亡小體污染的外泌體群體，理想情況下，不含其他類型的細胞外囊泡、蛋白質及其聚集體。由于大小差異很大，將外泌體與細胞、細胞碎片和大囊泡分離相對容易。巨大的挑戰是從小的脫落囊泡中純化外泌體，因為它們的大小非常相似。通過差速離心分離這些細胞外囊泡既困難又低效。所以需要根據轉子的特性和要分離的顆粒的特性，來對離心參數應進行調整。因為離心速度與粒子的旋轉半徑成正比，所以離心運動加速。粒子的徑向坐標隨時間t呈指數增長。手動超高速離心和自動化離心儀器的分離效果可能存在差異。西安肺泡外泌體分離費用

外泌體分離方法的優化需要對比不同方法的純度和收率。昆明外泌體測序

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗。二是PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養和體內注射。2016.9《ScientificReports》雜志發表了該方法較新數據，表明PS法可提取相當高純度的外泌體。昆明外泌體測序

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