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來源: 發布時間:2023-04-05

外泌體分離方法之尺寸排阻色譜分離法:尺寸排阻色譜(SEC)用于根據尺寸而非分子量分離大分子。該技術應用了一種填充有多孔聚合物珠子的柱子,該珠子含有多個孔和隧道。分子根據它們的直徑穿過珠子。小半徑分子通過色譜柱的孔遷移需要更長的時間,而大分子從色譜柱中洗脫得較早。尺寸排阻色譜可以精確分離大分子和小分子。此外,該方法可以應用不同的洗脫溶液。與離心機離心方法相比,色譜分離具有較多的優勢,因為通過色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,避免了因剪切力所造成的囊泡結構改變。目前,SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中存在的外泌體的技術。此外,SEC方法與超濾相結合已用于分離和分析尿源性外泌體。此外,流場-流分餾結合紫外分析儀和光散射檢測器已被應用于分析外泌體的大小和純度。流場-流分餾結合拋物線和交叉流來分離外泌體。獲得的外泌體已通過電子顯微鏡和質譜檢測。分離外泌體后需要通過電鏡等方式進行鑒定。合肥腦脊液外泌體制造商

外泌體分離方法之篩分分離法:該技術是通過膜從生物液體中篩分外泌體并通過壓力或電泳進行過濾來分離外泌體。篩分分離法的分離時間較短,但分離的外泌體純度卻處于較高的水平。篩分分離法的缺點在于分離的外泌體回收率較低。總之,細胞外泌體提取、外泌體分離在疙瘩等研究領域發揮著重要作用。細胞外泌體分離方法目前多數還是采用高速離心機進行離心分離的技術方法,然而,其他幾種分離技術,如過濾法、免疫分離法和篩分法,雖然也能進行外泌體分離,但每種方法都有其局限性,多數還是只應用于實驗室、科學研究等領域。合肥細胞外泌體分離公司外泌體作為一種重要的細胞通訊方式,在生物學和醫學研究中具有普遍的應用前景。

外泌體分離方法之沉淀分離方法::基于聚合物的沉淀分離方法是利用超親水聚合物來增強小尺寸顆粒(如外泌體)的沉淀。聚乙二醇的常用濃度在8%到15%之間變化。使用這種方法,將含有外泌體的溶液與聚合物一起孵育過夜,并在約10,000×g下進一步離心。外泌體分離方法之FFF分離法:FFF目前是一種很少使用但前景不錯的一種外泌體分離方法。分離由橫流力驅動,并基于顆粒的分子量或流體動力學直徑。它包括高純度、高效率和短時間處理,但迄今為止,FFF在外泌體分離中的使用案例較少,還有待進一步開發。

對于外泌體的標記和鑒定,獲得外泌體之后,如何對其進行鑒定又是一個困擾研究者的問題。國際細胞外囊泡學會(ISEV)在2014年提議,對于分離獲得的外泌體需要從三個層面進行鑒定:WB檢測外泌體標志蛋白表達情況:外泌體膜上富含參與外泌體運輸的跨膜蛋白家族(CD63/CD81/CD9)、熱休克蛋白家族(HSP60/HSP70/HSPA5/CCT2/HSP90)和一些細胞特異性蛋白。其中CD63/TSG101是較常用到的外泌體標志物。TEM鑒定外泌體形態:電鏡具有較高的分辨率,可以直接觀察到樣品中外泌體的形態。NTA檢測外泌體粒徑及濃度:TEM可以觀察外泌體的形態學特征,但無法體現樣本中所有外泌體的粒徑分布情況及整體濃度。NTA(NanoparticleTrackingAnalysis)技術可快速準確地分析外泌體的粒徑分布及濃度,為外泌體鑒定提供有力證據。外泌體在很多生理和病理情況下都發揮著不可或缺的作用。

外泌體的分離方法:目前,有許多可用的外泌體分離方法。比較傳統的外泌體分離方法是超速離心,許多人將其視為金標準。其他技術主要基于大小排阻或抗體介導的標記外泌體分離。每種分離方法在純度、數量、效率和通量方面都不同。超速離心法分離法的缺點是外泌體結構容易發生改變,造成外泌體的結構不一致性甚至會導致外泌體受損。超濾法:超濾法使用的是微孔過濾器;因此,較大的顆粒將從濾液中排除。它可以與離心結合使用,通過初步去除細胞碎片等大顆粒來加速外泌體的純化。不過使用此方法需要防止孔隙堵,不適合大規模的樣本處理。分離前的細胞培養和收集條件也能對外泌體分離結果產生重要影響。北京細胞外泌體分離多少錢

優化外泌體分離方法可以提高分離效率和分離精度。合肥腦脊液外泌體制造商

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