分離外泌體的方法之免疫親和相互作用:免疫親和法是利用外泌體表面蛋白(抗原)與其靶抗體或分離配體分子之間的免疫親和相互作用原理分離純外泌體的理想方法。它有助于根據其表面標志物分離特定類型的外泌體。基于微孔板的酶聯免疫吸附測定(ELISA)是免疫親和分離試劑盒的一個例子,用于根據外泌體表面標志物分離外泌體。Tetraspanin蛋白是這種分離方法的決定因素。抗CD9、抗CD63和抗CD81是免疫親和外泌體分離中使用的抗體的常見示例。免疫親和法可用于從結腸病細胞中分離外泌體,其效率高于超速離心和密度梯度分離。另外還有一種外泌體分離方法,該方法采用抗體包被的基于磁性顆粒的技術來分離外泌體。外泌體與生物體的免疫應答密切相關,通過它們攜帶的抗原和免疫調節分子對免疫系統起到調節作用。深圳肺泡外泌體分離
外泌體的表征分析:Zeta電位:通過電泳光散射(ELS)測量的Zeta電位測量粒子在電泳場中的速度。Zeta電位是膠體分散體穩定性的指標(非常值)和囊泡表面電荷的量度(+或-符號)。電子顯微鏡分析:對于電子顯微鏡分析,外泌體制劑在PBS緩沖液中按1:10稀釋,隨后在等體積的4%(w/v)多聚甲醛和1%(v/v)戊二醛中固定5分鐘。然后將樣品置于formvar-carbon涂層的600目銅網格上,并在室溫下干燥5分鐘。隨后將樣品在乙酸雙氧鈾溶液(2%水溶液)中進行對比,并在電子顯微鏡(Jeol1230TEM)下觀察,加速電壓為80kV,并連接到數碼相機進行觀察。深圳肺泡外泌體分離外泌體分離方法的優化需要對比不同方法的純度和收率。
外泌體(細胞外囊泡)目前被認為是通過生物活性脂質、蛋白質以及RNA來進行細胞之間的通訊,同樣外泌體也是目前研究較深入的細胞外囊泡,外泌體的直徑只有我們頭發直徑的百萬分之一(30~150nm),當多泡體與細胞膜融合時釋放到細胞外的時候,富含許多生物活性分子,如脂質、蛋白質、轉移RNA以及微小RNA等就會被外泌體被釋放到細胞外,這樣一來就可以被微環境中的靶細胞吸收并且通過通過生物體液運送到遠處。而外泌體與“目標”進行交流方式主要有兩種途徑,一是通過胞吞作用被攝入到細胞內;二是通過膜融合的方式來與靶細胞膜進行融合,接著就會直接釋放其中含有的物質以及信息至靶標細胞,其實外泌體的作用形式是相互的靶細胞分泌含有細胞特異性RNA的外泌體作用于周圍細胞后可誘導其表型重組而獲得組織特異性的表型,而周圍細胞分泌的外泌體則可以通過調控蛋白表達來調控細胞的生理過程。
外泌體是由細胞分泌的包含RNA和蛋白質的小囊泡,普遍存在于血液、唾液、尿液及乳汁等體液中,具有細胞信使功能,參與細胞通訊。外泌體是目前為止定義較為明確的細胞外囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其生成過程、釋放途徑、大小及功能區別于微囊泡(Microvesicles)和凋亡小體(Apoptosisbodies)。外泌體是內吞起源的小(40–100nm)囊泡群。外泌體和脫落的囊泡都含有特定的蛋白質組、RNA和,dsDNA等。不同的細胞外環境富含不同類型的細胞外囊泡。即使由相同的細胞類型形成,不同類別的囊泡也具有不同的核酸特征。分離外泌體的方法:細胞碎片、凋亡體、外泌體和其他EV一起存在于生物體液中,具有密度、形狀、大小和表面蛋白等物理性質的外泌體是分離機制的基礎。結合兩種或多種分離方法有助于有效地將外泌體與其他干擾成分分離。外泌體分離是外泌體研究中的重要步驟。
外泌體分離方法之密度梯度離心法:這種方法將超速離心機的超速離心與蔗糖密度梯度相結合。具體地說,密度梯度離心用于將外泌體與非囊泡顆粒(例如蛋白質和蛋白質/RNA聚集體)分離。因此,該方法將囊泡與不同密度的顆粒分離。足夠的離心時間比較重要,否則如果外泌體部分具有相似的密度,則仍可能在外泌體部分中發現污染顆粒。該結構不會讓大于1μm的細胞和其他顆粒進入布線區域。一些較小的顆粒和細胞碎片可以進入微柱區域,但被納米纖毛排除,形成直徑為30-200nm的孔。纖毛結構選擇性地捕獲外泌體和小細胞外囊泡。外泌體膜表面富含糖基化蛋白和糖基化脂質,這種糖基化在外泌體相互作用和定位中具有重要作用。青島肺泡外泌體分離多少錢
現有的外泌體分離方法可能存在樣品丟失和樣品污染的問題。深圳肺泡外泌體分離
為了正確使用外泌體作為DDS,我們必須考慮外泌體的成分和它們的形成途徑。然后,還應描述外泌體親和力和細胞攝取的特征。外泌體載體表現出不同的目的和功能,這要歸功于外泌體作為基本的轉運體本身就具有出色的特性。這可以用于細胞靶向,也可以作為藥物的額外增強。迄今為止,ExoCarta在外泌體中發現了大約10,000種蛋白質、3500種mRNA和超過1100種不同的脂質。對于系統審查,出現了許多很棒的數據庫,例如Vesiclepedia和ExoCarta,其中描述了外泌體分離程序和來源以及已識別的載體。深圳肺泡外泌體分離
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