外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時(shí)，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時(shí)，量少。外泌體富集、分離和檢測是當(dāng)前外泌體研究的熱點(diǎn)之一。北京血液RNA外泌體費(fèi)用

外泌體蛋白質(zhì)特征是:膜結(jié)合四跨膜蛋白（CD9、CD63、CD81和CD82），以及常規(guī)用于分離的EpCAM和Rab5。其他公認(rèn)的蛋白質(zhì)是受體（CD46和CD55）、熱休克蛋白（HSP；Hsc70、Hsp70和Hsp90）、參與外泌體形成的蛋白質(zhì)（Alix、TSG101）和負(fù)責(zé)融合和轉(zhuǎn)運(yùn)的膜蛋白（GTP酶、膜聯(lián)蛋白和flotillin；ATP7A、ATP7B、MRP2、SLC1A4、SLC16A1和CLIC1)等。使用ELISA法檢測這些標(biāo)記蛋白可以用于確認(rèn)外泌體的存在。也有相關(guān)研究稱外泌體含有其他顆粒，如膽固醇（B淋巴細(xì)胞來源）、鞘脂、磷酸甘油酯和神經(jīng)酰胺等。外泌體還運(yùn)輸形態(tài)發(fā)生素（Hedgehog、Wingless和Wingless-like），參與黑腹果蠅所描述的組織模式發(fā)育。寧波肺泡外泌體分離費(fèi)用外泌體膜表面富含糖基化蛋白和糖基化脂質(zhì)，這種糖基化在外泌體相互作用和定位中具有重要作用。

外泌體的物理表征方法：常用的外泌體物理表征方法是基于顯微鏡的方法，例如透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡、低溫電子顯微鏡和原子力顯微鏡；動(dòng)態(tài)光散射；納米粒子跟蹤分析；可調(diào)電阻脈沖傳感；和單個(gè)EV分析等。用于分析外泌體濃度、定量和概況的分子生物方法主要包括：實(shí)時(shí)定量PCR、數(shù)字PCR技術(shù)（基于芯片的dPCR、液滴數(shù)字PCR、ddPCR）、蛋白質(zhì)免疫印跡、全基因組測序（next-generationsequencing）、exome-targetedsequencing（下一代測序）、微陣列圖譜技術(shù)和ELISA技術(shù)等。

外泌體分離方法之尺寸排阻色譜分離法：尺寸排阻色譜(SEC)用于根據(jù)尺寸而非分子量分離大分子。該技術(shù)應(yīng)用了一種填充有多孔聚合物珠子的柱子，該珠子含有多個(gè)孔和隧道。分子根據(jù)它們的直徑穿過珠子。小半徑分子通過色譜柱的孔遷移需要更長的時(shí)間，而大分子從色譜柱中洗脫得較早。尺寸排阻色譜可以精確分離大分子和小分子。此外，該方法可以應(yīng)用不同的洗脫溶液。與離心機(jī)離心方法相比，色譜分離具有較多的優(yōu)勢，因?yàn)橥ㄟ^色譜分離的外泌體不受剪切力的影響，避免了因剪切力所造成的囊泡結(jié)構(gòu)改變。目前，SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中存在的外泌體的技術(shù)。此外，SEC方法與超濾相結(jié)合已用于分離和分析尿源性外泌體。此外，流場-流分餾結(jié)合紫外分析儀和光散射檢測器已被應(yīng)用于分析外泌體的大小和純度。流場-流分餾結(jié)合拋物線和交叉流來分離外泌體。獲得的外泌體已通過電子顯微鏡和質(zhì)譜檢測。外泌體與神經(jīng)系統(tǒng)的關(guān)系復(fù)雜，通過在神經(jīng)元間的轉(zhuǎn)移，參與多種神經(jīng)疾病的發(fā)生和病理機(jī)制的形成。

外泌體分離方法之過濾法：超濾膜也可用于外泌體的分離。根據(jù)微泡的大小，使用超濾膜過濾的方法可以將外泌體與蛋白質(zhì)和其他大分子分離。外泌體也可以通過多孔結(jié)構(gòu)捕獲它們來分離。常見的過濾膜孔徑為0.8m、0.45m或0.22m，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體。比如微柱多孔硅纖毛結(jié)構(gòu)一般用于分離40-100nm外泌體。在初始步驟中，去除較大的囊泡。在接下來的步驟中，外泌體會(huì)群集中在過濾膜上。隔離步驟相對較短，但該方法需要用PBS緩沖液對硅結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)孵育。除標(biāo)準(zhǔn)過濾技術(shù)外，切向流過濾在有效分離外泌體方面也有著嘗試應(yīng)用，通過切向流過濾技術(shù)去除游離肽和其他小化合物從而分離具有確定大小的外泌體。此外，在體外研究和脂肪組織中，也會(huì)采用超濾與SEC的結(jié)合的方式來分離外泌體。通過(a)對片上過濾器施加壓力或(b)產(chǎn)生電場，迫使外泌體穿過多孔膜，結(jié)合錯(cuò)流和電泳分選來完成篩分。發(fā)現(xiàn)外泌體轉(zhuǎn)移可能為疾病治著和預(yù)后提供新的治著策略。天津肺泡外泌體制造商

外泌體的分離純化有助于其后續(xù)研究，例如外泌體功能的解析等。北京血液RNA外泌體費(fèi)用

外泌體分離方法之親和層析分離法：在親和層析分離法方面，主要使用凝集素和合成Vn(venceremin)肽。凝集素將結(jié)合存在于外泌體表面的糖基化蛋白質(zhì)，從而使外泌體沉淀。Vn肽分離技術(shù)基于其對含有HSP的細(xì)胞外顆粒的高親和力。然而，這種方法比較容易使提取物被膜表面上含有上述標(biāo)記物的細(xì)胞和其他顆粒污染。外泌體分離方法之介電泳分離法：介電泳分離法主要利用不同大小的粒子在不均勻電場中的位置差異。外泌體被吸引到高電區(qū)域，而較大的顆粒將位于低電區(qū)域。該方法速度快，適合用于高通量篩選，但缺點(diǎn)是需要加熱。北京血液RNA外泌體費(fèi)用

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