外泌體分離方法優(yōu)缺點對比：差速離心法：差速離心法仍是實驗中常用的外泌體分離技術(shù)。主要步驟如下：1.使用離心機低速離心來去除細胞與細胞碎片。2.而后增加轉(zhuǎn)速通過離心來消除樣本中較大的細胞囊泡。3.再使用高速離心機進行高速離心，通過離心沉淀的方式提取外泌體。在這里，需要注意的是生物流體的粘度與分離的外泌體的純度有較強的相關(guān)性。所以，對于高粘度的生物樣品需要超速離心機進行較長時間的離心操作。外泌體分離方法之免疫分離法：免疫芯片方法基于表面外泌體受體，用于根據(jù)來源分離外泌體。獲得的外泌體可直接分析或用于DNA或總RNA分離。外泌體胞內(nèi)蛋白可用作分離外泌體的特異性標志物。此外，基于ELISA的ExoTEST也可以用于有效分離外泌體。其原理是：使用涂有外泌體抗體的ExoTEST板，可以從各種生物體液中分離出外泌體。該方法適用于常見和細胞類型特異性外泌體蛋白的檢測、分析和定量。外泌體的組成成分包括脂肪、糖、蛋白質(zhì)等，對其組成成分的分析有助于了解其生物學(xué)功能和生理調(diào)節(jié)作用。西安細胞外泌體哪家好
外泌體還參與神經(jīng)退行型癥。在神經(jīng)退行型癥個體的腦脊液和外周血中已檢測到幾種特定于阿爾茨海默氏癥、帕金森氏癥和Creutzfeldt-Jakob的聚集蛋白。特別是，在從阿爾茨海默者的腦脊液樣本中獲得的外泌體中檢測到Thr-181磷酸化的tau。在Thr-181磷酸化的Tau是阿爾茨海默的既定生物標志物。此外，α-突觸核的蛋白也常在阿爾茨海默者的群體中檢出。此外，在尿液中發(fā)現(xiàn)的外泌體標志物也可以是膀胱和前列腺疙瘩的標志物。比如：視黃酸誘導(dǎo)蛋白3(GPRC5A)、抵抗素、外泌體蛋白PCA-3、TMPRSS2:ERG、α1-抗胰蛋白酶、組蛋白H2B1等。除了腦和泌尿道疙瘩外，外泌體蛋白也可以是胰腺病的標志物。比如：結(jié)直腸病的外泌體蛋白標志物包括EpCAM、cadherin-17、粘蛋白13(MUC-13)、角蛋白18、claudins和ephrinB1。合肥血漿外泌體外泌體可以作為一種新型的藥物輸送系統(tǒng)，利用其高度選擇性的靶向性，有效地提高藥物的生物利用度。
細胞外泌體的來源和表征方法：細胞外泌體是直徑為30-150nm的血管外囊泡亞群。在過去的20年里，科學(xué)家已經(jīng)從包括正常細胞和病細胞在內(nèi)的許多細胞類型中分離出外泌體，并且研究了它們對其他細胞的影響。外泌體是由多種大分子組成，例如核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。細胞外泌體具有天然的特定細胞靶向特性，通常被設(shè)計用于靶向大分子（DNA和RNA）和藥物遞送系統(tǒng)（多柔比星、紫杉醇和紫杉醇）。目前常用細胞外泌體的分離方法主要是超速離心法、密度梯度離心法、超濾分離法、基于聚合物的沉淀法、親和沉淀分離法、免疫磁珠法和色譜法等。
外泌體可以傳遞生物分子，例如蛋白質(zhì)、DNA、mRNA等，影響接收器細胞的表現(xiàn)型和生理活性。外泌體可通過特定的組裝和功能修飾，提高其對宿主細胞的選擇性靶向性。核酸是在外泌體中發(fā)現(xiàn)的另一組主要顆粒，即DNA和RNA，它們可以在細胞中發(fā)揮功能作用。在源自小鼠和人類肥大細胞的外泌體中發(fā)現(xiàn)了約1300種mRNA、121種miRNA和>100種小RNA，但未檢測到DNA和rRNA。在外泌體中發(fā)現(xiàn)的其他miRNA是lin-4和let-7，以及母乳中的miR-181a和miR-155。小鼠外泌體對人類細胞的刺激可以導(dǎo)致人類細胞中小鼠蛋白質(zhì)的合成。此外，外泌體和受體細胞的mRNA譜不同，表明mRNA被主動分選為MVB。未來可開發(fā)更加高效和精確的外泌體分離和檢測技術(shù)。
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準備工作繁雜，耗時，量少。發(fā)現(xiàn)外泌體轉(zhuǎn)移可能為疾病治著和預(yù)后提供新的治著策略。青島細胞外泌體生產(chǎn)商
分離前的細胞培養(yǎng)和收集條件也能對外泌體分離結(jié)果產(chǎn)生重要影響。西安細胞外泌體哪家好
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗。二是PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù)，表明PS法可提取相當高純度的外泌體。西安細胞外泌體哪家好
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