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東莞血液RNA外泌體分離制造商

來源: 發布時間:2023-04-18

外泌體蛋白質特征是:膜結合四跨膜蛋白(CD9、CD63、CD81和CD82),以及常規用于分離的EpCAM和Rab5。其他公認的蛋白質是受體(CD46和CD55)、熱休克蛋白(HSP;Hsc70、Hsp70和Hsp90)、參與外泌體形成的蛋白質(Alix、TSG101)和負責融合和轉運的膜蛋白(GTP酶、膜聯蛋白和flotillin;ATP7A、ATP7B、MRP2、SLC1A4、SLC16A1和CLIC1)等。使用ELISA法檢測這些標記蛋白可以用于確認外泌體的存在。也有相關研究稱外泌體含有其他顆粒,如膽固醇(B淋巴細胞來源)、鞘脂、磷酸甘油酯和神經酰胺等。外泌體還運輸形態發生素(Hedgehog、Wingless和Wingless-like),參與黑腹果蠅所描述的組織模式發育。外泌體的轉移涉及細胞因子、基質降解酶和細胞外基質重塑等多種調節步驟。東莞血液RNA外泌體分離制造商

外泌體可以傳遞生物分子,例如蛋白質、DNA、mRNA等,影響接收器細胞的表現型和生理活性。外泌體可通過特定的組裝和功能修飾,提高其對宿主細胞的選擇性靶向性。核酸是在外泌體中發現的另一組主要顆粒,即DNA和RNA,它們可以在細胞中發揮功能作用。在源自小鼠和人類肥大細胞的外泌體中發現了約1300種mRNA、121種miRNA和>100種小RNA,但未檢測到DNA和rRNA。在外泌體中發現的其他miRNA是lin-4和let-7,以及母乳中的miR-181a和miR-155。小鼠外泌體對人類細胞的刺激可以導致人類細胞中小鼠蛋白質的合成。此外,外泌體和受體細胞的mRNA譜不同,表明mRNA被主動分選為MVB。溫州外泌體制造商分離前的細胞培養和收集條件也能對外泌體分離結果產生重要影響。

外泌體的表征方法之微流體分析技術:微流體技術在外泌體研究方面也起著推動作用。微流體技術不只提供了高質量、高特異性的數據,并且試劑消耗量低,通量高.基于微流體技術的研究方法需要結合使用微流控芯片,微流控芯片通常由玻璃基和聚二甲基硅氧烷(PDMS)膜制成,包含許多尺寸適合所分析樣品的微通道。主要區別在于芯片的內表面,可以通過多種方式對其進行功能化,例如通過涂層、多層沉積、電沉積和蝕刻.目前研究中針對不同的微流控表征方法,也制造了不同類型的微芯片,包括免疫芯片、磁性芯片和電化學芯片。外泌體及其蛋白質也可以通過比色法(標記抗體/ELISA)、直接熒光染色(DiO染料)、電化學性質變化和光學特別方法進行檢測。對于結果評估,還需要額外的設備,例如讀板器或熒光顯微鏡等。

外泌體來源及其釋放途徑:外泌體在人體的主要作用是充當局部和全身信號和調節系統。外泌體(直徑30-150nm)是較小的血管外囊泡亞群,它的還包括微泡(50nm-1μm)和凋亡小體(50nm-5μm)。外泌體的來源是內體系統。由內膜出芽形成早期核內體,早期內體可以與內吞小泡融合,從而引導它們的貨物進行回收、降解或分泌。當早期內體成熟為晚期內體時,在它們成熟為晚期核內體的過程中,囊泡膜向內出芽,導致多泡體(MVB)的產生,其中包含許多腔內囊泡(ILV).在此階段,MVB可以與溶酶體融合(ILV繼續降解)或與質膜融合,導致ILV釋放到細胞外空間。這些釋放的ILV稱為外泌體,包含著許多源自細胞內部的蛋白質、核酸、脂質和多糖。另一種釋放機制就是由于質膜向外出芽,從而導致形成所謂的脫落微泡或外泌體。外泌體可通過特定的組裝和功能修飾,提高其對宿主細胞的選擇性靶向性。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。外泌體可通過細胞間物質轉移影響細胞的增殖、分化和生物學行為。蘇州上清外泌體分離公司

超高速離心是常用的外泌體分離方法之一。東莞血液RNA外泌體分離制造商

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