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煙臺尿液外泌體分離蛋白檢測

來源: 發布時間:2023-04-21

外泌體衍生物miRNA的重要應用:miRNA是一類主要的小分子、單鏈、非編碼RNA分子,其成熟形式的長度在20到22個核苷酸(NT)之間,在幾乎所有生物途徑中發揮重要作用,包括細胞生長、增殖、分化、免疫反應,細胞凋亡,代謝和疙瘩發生。外泌體在體液中的主要作用是可以保護miRNA,防止其生物分子在非生理條件下(多次凍融循環、長期儲存和極端pH)降解。據報道,外泌體來源的miRNA在-20°C下可保持穩定長達5年,并且對凍融循環具有抵抗力.這也使外泌體成為病癥和其他疾病的潛在生物標志物。miRNA與包括病癥在內的許多疾病的發病機制有關,并且還被證明被遠端或附近的受體細胞吸收作為外泌體中的貨物,作為細胞間通訊的一種方法,可能會影響發病機制。所以,外泌體可以被看作是miRNA轉移至目標受體細胞的載體。外泌體可以通過非典型途徑進行排毒,參與細胞解掉毒和化學治著的作用。煙臺尿液外泌體分離蛋白檢測

外泌體通常被認為是細胞間信號分子,包含許多蛋白質、核酸、細胞因子、轉錄因子和其他細胞來源的顆粒。外泌體不只可以向局部環境傳遞信息,還可以向距離很遠的細胞和組織傳遞信息。這可能作為一般信號和通信通路,但也可能參與致病基因擴散和惡性疙瘩進一步惡化。迄今為止,已證實外泌體存在于體液中,例如羊水、血清、母乳、附睪液、唾液、尿液、腹水和胸腔積液、支氣管肺泡灌洗液、滑液和體外細胞培養上清液中。細胞排出的外泌體也可作為去除不必要的蛋白質和核酸的一種方式,例如,在細胞成熟(網織紅細胞)或排泄系統(腎的內臟和小管)期間的外泌體。東莞血液RNA外泌體費用分離過程中避免對外泌體結構和功能造成影響至關重要。

外泌體的表征方法之非光學方法:非光學方法主要包括掃描電子顯微鏡(SEM)、透射電子顯微鏡(TEM)、冷凍電子顯微鏡(Cryo-EM)、原子力顯微鏡(AFM)、免疫檢測方法(ELISA)、傅立葉變換紅外光譜(FTIR)、可調諧電阻脈沖傳感(TRPS)和單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)。SEM、TEM和AFM方法通常用于直接膜結構和形態測定,而ELISA檢測提供各種結構顆粒(主要是蛋白質和受體)的檢測和量化,例如,用于外泌體形態的確認。單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)也用于外泌體定量,但也可用于檢測特定標記物和確定外泌體亞群。

外泌體是由正常或病理條件下的細胞所分泌,含有各種膜蛋白和胞質蛋白。因此,外泌體蛋白也可以作為生物試劑潛在地用于蛋白診斷。外泌體中發現的十種蛋白質主要包括熱休克蛋白8(HSPA8)、CD63抗原(CD63)、β肌動蛋白(ACTB)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、烯醇化酶1α、細胞溶質熱休克蛋白90α(HSP90AA1)、CD9、CD81、酪氨酸3-單加氧酶/色氨酸5-單加氧酶打開蛋白、zeta多肽(YWHAZ)、肌肉酸激酶(PKM2)。外泌體蛋白屬于各種功能組,例如四跨膜蛋白(CD9、CD63和CD81)、熱休克蛋白(HSC70和HSC90)、膜轉運蛋白(GTPases)和脂質結合蛋白。外泌體標記物及其在免疫組織化學、免疫細胞化學、流式細胞術和ELISA等抗體應用中的常用的單克隆抗體。外泌體與肺的關系密切,通過氣道和肺泡微環境的打開和修飾,參與肺疾病如肺結核、肺病等的發生和發展。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。外泌體與細胞死亡形式相關,可以參與凋亡和壞死細胞的清理和處理過程。西安細胞外泌體分離企業

外泌體作為一種重要的細胞通訊方式,在生物學和醫學研究中具有普遍的應用前景。煙臺尿液外泌體分離蛋白檢測

外泌體分離方法優缺點對比:差速離心法:差速離心法仍是實驗中常用的外泌體分離技術。主要步驟如下:1.使用離心機低速離心來去除細胞與細胞碎片。2.而后增加轉速通過離心來消除樣本中較大的細胞囊泡。3.再使用高速離心機進行高速離心,通過離心沉淀的方式提取外泌體。在這里,需要注意的是生物流體的粘度與分離的外泌體的純度有較強的相關性。所以,對于高粘度的生物樣品需要超速離心機進行較長時間的離心操作。外泌體分離方法之免疫分離法:免疫芯片方法基于表面外泌體受體,用于根據來源分離外泌體。獲得的外泌體可直接分析或用于DNA或總RNA分離。外泌體胞內蛋白可用作分離外泌體的特異性標志物。此外,基于ELISA的ExoTEST也可以用于有效分離外泌體。其原理是:使用涂有外泌體抗體的ExoTEST板,可以從各種生物體液中分離出外泌體。該方法適用于常見和細胞類型特異性外泌體蛋白的檢測、分析和定量。煙臺尿液外泌體分離蛋白檢測

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