骨組織RNA提取方法及步驟:適用于快速提取骨組織細胞總RNA,使用獨有基因組DNA清理柱技術可有效清理電泳可見gDNA殘留,RNA可用于反轉錄PCR,熒光定量PCR等。骨組織堅硬、骨細胞密度低、而且外周基質含有大量黏蛋白(蛋白多糖)和RNA難以分離,無法用傳統Trizol法進行高質量提取。本方法采用獨有的不含苯酚/氯仿配方的裂解液,并添加多種成分去除骨組織蛋白多糖。同時獨特基因組DNA清理柱技術可以有效清理gDNA殘留,得到的RNA一般不需要DNase消化,可用于反轉錄PCR、熒光定量PCR等實驗。獨特的裂解液迅速裂解細胞和滅活細胞RNA酶,離心沉淀去除多糖和次級代謝產物,然后裂解混合物用乙醇調節RNA結合吸附到基因組DNA清理柱,然后RNA被選擇性洗脫濾過,吸附在基因組DNA清理柱上的殘留DNA無法洗脫連同柱子一起丟棄從而清理掉DNA。濾過的RNA用乙醇調節結合條件后,RNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細胞代謝物,蛋白等雜質去除,較后低鹽的RNasefreeH20將純凈RNA從硅基質膜上洗脫。DNA提取的方法有很多種,包括CTAB法、鹽法、酚-氯仿法等。病毒RNA提取可測序
磁珠法提取DNA提取方法:洗滌:核酸的高電荷磷酸骨架使其比蛋白質、多糖、脂肪等其他生物大分子物質更具親水性,根據它們理化性質的差異,用選擇性沉淀、層析、密度梯度離心等方法可將核酸分離、純化。用無水乙醇沉淀DNA,這是實驗中較常用的沉淀DNA的方法。乙醇的優點是可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學反應,對DNA很安全,因此是理性的沉淀劑。當加入乙醇時,乙醇會奪去DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合。洗脫:加水或者EB破壞高鹽環境,形成低鹽環境,使DNA從磁珠上脫落。外泌體DNA提取供貨商RNA提取可以用于分析RNA的序列和結構。
microRNA富集方法(只提取microRNA,不包含>200nt其它總RNA成份。)1.按照前面標準操作步驟1-5操作,直到得到上清。2.較精確估計上清體積(約600μl),加入等體積70%乙醇(請先檢查是否已加入無水乙醇!)(必須是室溫的),渦旋或者吹打充分混勻,不要離心。3.將混合物加入一個吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)12,000rpm離心30-60秒,收集濾過物。將濾過物從收集管轉移到一個新的離心管后,把吸附柱子放回空的收集管內,再加入剩下的混合物,離心,收集濾過物。合并兩次濾過物,計算體積。此時,濾過物含有microRNA,吸附柱子上面是除去了microRNA的總RNA(不包含microRNA),如果需要,可以按照前面標準操作步驟8-11操作漂洗,洗脫回收得到去除了microRNA的總RNA。
骨組織RNA提取方法及步驟:頭一次使用前請先在漂洗液RW瓶加入指定量無水乙醇!取1ml裂解液CLB至離心管內(如果CLB有析出或者沉淀需先置于65°C水浴重新溶解),在裂解液CLB中加入100μlP的LANTaid,顛倒混勻后65°C水浴中預熱。多個樣品按照比例放大準備。液氮研磨法:a.骨鉗夾碎骨組織后放入研缽(研缽在180度干烤2小時),加入液氮后反復研磨成細粉,注意液氮蒸發后不斷補加保存液氮一直存在。b.轉移100mg細粉加至預熱的裂解液CLB(已加有P的LANTaid)離心管中。立即劇烈渦旋30-60秒或者用吸頭吹打混勻裂解直得到滿意勻漿結果(或者電動勻漿30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高產量。DNA提取的原則,其他核酸分子,如RNA,也應盡量去除。
外泌體DNA提取過程:1、將吸附柱放入收集管內,將700μL上述溶液轉入吸附柱內,12,000rpm4℃離心1分鐘,棄收集管內廢液;將剩余溶液轉移至吸附柱內,12,000rpm4℃離心1分鐘,棄收集管內廢液。2、將吸附柱放回收集管內,加500μL洗滌液A至吸附柱內,靜置2分鐘,12,000rpm4℃離心1分鐘,棄收集管內廢液。3、將吸附柱放回收集管內,加500μL洗滌液B至吸附柱內,12,000rpm4℃離心1分鐘,棄收集管內廢液。4、按每份樣本40μL取洗脫液(如10份提取樣本,即取400μL洗脫液),放置于滅菌1.5mL離心管,65℃預熱。5、將吸附柱放回收集管內,12,000rpm4℃離心2分鐘,離去殘留的洗滌液。6、取出吸附柱,放入新的1.5mL離心管內,加入上述預熱的40μL洗脫液,靜置3分鐘,12,000rpm4℃離心1分鐘,收集DNA溶液。7、-20℃保存,或直接用于下一步實驗。DNA提取需要通過加入濃鹽然后離心分離細胞碎片、消化蛋白質、脂質和RNA。廣州細胞RNA提取報價
DNA提取需要通過添加RNase消化RNA。病毒RNA提取可測序
磁珠法DNA提取試劑盒是納米技術、分子生物學技術、生物醫學技術和法醫學技術的綜合高科技產品。可普遍應用于分子生物學中的基因組研究、分子進化研究、醫學中遺傳病的研究、突變基因的檢測、腫的篩查、HPV等的檢測、HLA分型、移植配型等、法醫學生物樣本血斑、精斑、頭發、煙蒂等現場證物的檢測、和司法上的親子鑒定、血緣關系的鑒定等提供證據、考古學、大中小學的生物實驗等許多領域。磁珠法提取DNA試劑盒要比傳統的方法,例如:Chelex100法、有機法、二氧化硅法、鹽析法等更為簡單、方便,轉移離心管的次數較少,不易污染等。磁珠法在DNA純化、微量檢裁及PCR擴增等方面是其它方法不可代替的。病毒RNA提取可測序
蘇州英澤生物醫藥科技有限公司是我國RNA\DNA試劑盒,外泌體提取試劑盒,逆轉錄試劑盒,熒光定量PCR專業化較早的有限責任公司(自然)之一,英澤生物是我國醫藥健康技術的研究和標準制定的重要參與者和貢獻者。公司主要提供生物醫藥和醫療領城內的技術開發、技術咨詢、技術轉讓及相 關的技術服務;化工原料及產品、生物儀器試劑(不含?;?品)、儀器儀表、電子產品的購銷;生物技 術推廣服務;貨物或技術進出口(國家禁止或涉及行政審批的 貨物和技術進出口除外) (依法須經批準的項目, 經相關部門批準后方可開展經營活 動) 一般項目:醫學研究和試驗發展;工業酶制劑研發(除依法須 能分準機項目外等領域內的業務,產品滿意,服務可高,能夠滿足多方位人群或公司的需要。多年來,已經為我國醫藥健康行業生產、經濟等的發展做出了重要貢獻。