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廈門DNA提取

來源: 發(fā)布時間:2023-05-11

DNA提取鑒定方法:分光光度法:在260nm和280nm處測定DNA溶液的光吸收,A260與A280之比應(yīng)在1.75-1.80之間。低于此值表明制備物中殘留蛋白質(zhì)成分較高或含有酚,高于此值表明有RNA的殘留。凝膠電泳分析:影響瓊脂糖凝膠電泳DNA遷移率的因素:①DNA分子大小,DNA分子越大遷移速度越慢。②遷移率與瓊脂糖濃度成反比。③DNA構(gòu)象:a.相同分子量的超螺旋環(huán)狀(Ⅰ型),切口環(huán)狀(Ⅱ型),線狀(Ⅲ型)DNA,以不同速率通過凝膠。b.一般情況下,遷移率Ⅰ型>Ⅲ型>Ⅱ型。④電壓:遷移率與所加電壓成正比,但是電壓過大有效分離范圍減小。⑤電場方向:單一方向速率均等,改變方向,極大分子DNA遷移更慢。通過脈沖電場凝膠電泳分離極大DNA。DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。廈門DNA提取

DNA提取的基本步驟:1.細胞裂解與細胞裂解緩沖液裂解細胞膜;2.脂質(zhì)被洗滌劑和表面活性劑分解;3.通過添加蛋白酶消化蛋白質(zhì);4.通過添加RNase消化RNA;5.通過加入濃鹽然后離心分離細胞碎片、消化蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和RNA;6.用冰冷的乙醇或異丙醇乙醇沉淀DNA。醋酸鈉的離子強度可用于改善沉淀。沉淀的DNA在較終溶液中呈線狀。酚-氯仿萃取也可用于從蛋白質(zhì)中分離DNA。在這里,苯酚使樣品中的蛋白質(zhì)變性,DNA在提取結(jié)束時保留在水相中。而且,在有機相中,您可以找到變性的蛋白質(zhì)。另一種提取DNA的方法是微柱純化。在這里,DNA與柱子的結(jié)合取決于緩沖液的pH值和鹽濃度。蘇州細胞DNA提取公司DNA提取需要使用化學試劑和設(shè)備,如離心機、研缽、酶等。

DNA提取方法:一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速離心后取上清,所得DNA大小為100-150kb二.甲酰胺解聚法:破碎細胞同上,然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。三.玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細胞,將裂解物鋪于乙醇上,然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。四.異丙醇沉淀法:基本同1法,只用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態(tài))五.表面活性劑快速制備法:用TritonX-100A或NP40表面活性劑破碎細胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。六.加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,五分鐘,然后離心后取上清,可用于PCR反應(yīng)。七.堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和,離心后取上清,含少量DNA。

磁珠法提取DNA提取的優(yōu)勢,磁珠法是納米科技與生物技術(shù)的完美結(jié)合,具有其他DNA提取方法無法比擬的優(yōu)勢,主要體現(xiàn)在:1、能夠?qū)崿F(xiàn)自動化、高通量操作,配合96孔的核酸自動提取儀,在以往做一個樣品的提取時間內(nèi)可同時實現(xiàn)對96個樣品的處理,效率直接提高96倍,滿足了當前生物學高通量操作的要求,使得在大規(guī)模戴口罩爆發(fā)時能夠進行快速篩查原因,這個優(yōu)點是其他方法難以趕超的。2、操作簡單、用時短,整個提取流程只有裂解、結(jié)合、洗滌、洗脫四步短時間內(nèi)即可完成。3、安全無毒,不使用傳統(tǒng)方法中的苯、氯仿等有毒試劑,對實驗操作人員的傷害少,保護了實驗人員的身體健康。4、磁珠與核酸的特異性結(jié)合使得提取的核酸純度高、濃度大。5、靈敏度高,適合法醫(yī)樣本等痕量DNA提取。RNA提取是從細胞或組織中分離RNA的過程。

磁珠法提取DNA提取方法:實驗步驟,磁珠法核酸提取一般可以分為四步:裂解——結(jié)合——洗滌——洗脫。裂解:核酸必須從細胞或其他生物物質(zhì)中釋放出來,細胞裂解可通過機械作用、化學作用、酶作用等方法實現(xiàn)。其中,酶作用主要是通過加入溶菌酶或蛋白酶(蛋白酶K、植物蛋白酶或鏈霉蛋白酶)以使細胞破裂,核酸釋放。蛋白酶還能降解與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì),促進核酸的分離。結(jié)合:磁珠表面帶負電荷,磁珠buffer是高鹽環(huán)境有帶正電荷的鹽離子,樣本被buffer影響,磷酸基團帶負電荷。RNA提取可以使用不同的方法,例如酚/氯仿法、硅膠柱法或磁珠法。蘇州細胞DNA提取公司

RNA提取可以用于研究不同類型的RNA,例如mRNA、rRNA或miRNA。廈門DNA提取

DNA提取定量:分光光度法:測定DNA在A260的光吸收,計算濃度。雙鏈DNA:A260*稀釋倍數(shù)*50(ug/ml)單鏈DNA:A260*稀釋倍數(shù)*40(ug/ml)單鏈核苷酸DNA:A260*稀釋倍數(shù)*20(ug/ml).瓊脂糖平板法:在含溴乙錠的瓊脂糖平板上滴1-5ul樣品DNA和已知濃度標準品,放置數(shù)小時后檢測。微型凝膠電泳:將樣品和標準品同時電泳,染色,比較熒光強度。DNA提取之貯存:短期儲存:4℃或-20℃存放于TE緩沖液中。長期貯存:在70%乙醇,或在DNA溶液中加一滴氯仿,-70℃保存。廈門DNA提取

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