分離外泌體的方法之超速離心:離心是一種利用不同的離心力根據顆粒成分的密度、大小和形狀沉淀顆粒成分的過程。超速離心是一種離心過程,較多使用6×106g離心力,有助于隔離更小的組件,例如,核糖體、蛋白質、病毒、外泌體和其他EV。加速度(g)、旋轉半徑、樣品粘度和沉降路徑長度是有效分離外泌體的決定因素。20至250nm之間的粒徑分數可以通過超速離心分離,隨后的離心或尺寸排阻過程產生所需的外泌體。超速離心法被認為是外泌體分離的金標準方法,外泌體需要1×105至2×105g離心1小時。在順序離心過程中,MVs、凋亡小體、細胞碎片、細胞和其他具有較高浮力密度的顆粒在外泌體之前沉淀。然而,必須注意的是,由于密度和大小重疊,大多數當前方法只能富集小EV(即外泌體)。外泌體可以通過非典型途徑進行排毒,參與細胞解掉毒和化學治著的作用。蘇州細胞外泌體
外泌體的表征方法之光學方法:目前,光學方法是外泌體表征的主要方法,即動態光散射(DLS)、多角度光散射(MALS)和納米粒子跟蹤分析(NTA)。這些方法允許對尺寸(DLS0.5–200nm;MALS10–500nm;NTA10–1000nm)、尺寸分布和濃度進行高分辨率測量。DLS和MALS的結合增加了測量范圍(0.5–500nm)和精度。光學方法比較受歡迎的,但缺點是靈敏度低、試劑消耗高以及需要昂貴的設備。在使用納米粒子跟蹤分析NTA方法過程中,熒光染料的加入也提高了分辨率,并允許通過使用熒光標記來表征表面免疫表型。從而確定標記物存在。上海肺泡外泌體報價表外泌體攜帶的小分子物質(如ATP、GTP等)參與細胞生命活動、代謝、細胞生長和分化等生物學進程。
差速離心法分離外泌體的實驗原理:與等密度和梯度離心相反,差速離心從離心管內顆粒的均勻初始分布開始。在開始一輪離心過程中,位于管底部附近的一部分目標小顆粒不可避免地與較大顆粒共同沉淀。這種共沉淀導致較小顆粒的產量降低。然而,選擇大顆粒,起初位于管半月板附近,在開始一輪離心過程中可能沒有足夠的時間到達管底,從而污染較后一個離心步驟產生的小顆粒顆粒。顯然,交叉污染的程度取決于不同粒子群的相對沉降速度和離心條件。在被分離的粒子的沉降速度之間存在顯著(數量級)差異的情況下,可以有效地優化差速離心協議以獲得目標粒子群的高產量和足夠純度。此外,當不同顆粒部分之間的沉降速率只存在微小差異時,優化過程不太成功。在這些情況下,取決于離心條件。
使用差速離心法分離外泌體主要需要注意的是轉子的選擇。“擺動桶”(SW)轉子和“定角”(FA)轉子,這些轉子的幾何形狀根本不同,因此沉降特性也不同。這些轉子之間的主要區別在于:FA轉子,與旋轉半徑相比,沉積顆粒的較大路徑長度通常較小,允許近似恒定遷移率并簡化描述。然而,第二個區別是圓形FA管的水平橫截面是橢圓形的,不同粒子的路徑長度根據軌跡與橢圓長軸的距離而不同。由于較短的路徑長度,外面顆粒可能沉降得更快,需要根據不同的實驗需要進行選擇。優化外泌體分離方法可以用于解決外泌體復雜性掩蓋的問題。
外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30-150nm),現今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年,外泌體頭次于綿羊網織紅細胞中被發現,1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。所有培養的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創診斷的開發。外泌體與細胞死亡形式相關,可以參與凋亡和壞死細胞的清理和處理過程。煙臺腦脊液外泌體分離多少錢
外泌體可通過血液或其他體液傳播,從而在遠離原發灶的部位誘導細胞生長和轉移。蘇州細胞外泌體
外泌體分離方法之沉淀分離方法::基于聚合物的沉淀分離方法是利用超親水聚合物來增強小尺寸顆粒(如外泌體)的沉淀。聚乙二醇的常用濃度在8%到15%之間變化。使用這種方法,將含有外泌體的溶液與聚合物一起孵育過夜,并在約10,000×g下進一步離心。外泌體分離方法之FFF分離法:FFF目前是一種很少使用但前景不錯的一種外泌體分離方法。分離由橫流力驅動,并基于顆粒的分子量或流體動力學直徑。它包括高純度、高效率和短時間處理,但迄今為止,FFF在外泌體分離中的使用案例較少,還有待進一步開發。蘇州細胞外泌體
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