外泌體分離方法之基于聚合物的沉淀法：基于聚合物的沉淀技術(shù)通常包括將生物流體與含聚合物的沉淀溶液混合、4℃孵育和低速離心。用于基于聚合物的沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。這種聚合物的沉淀可以對分離的外泌體產(chǎn)生溫和影響而且可以產(chǎn)生中性的pH值。由此，出現(xiàn)了幾種常見的外泌體試劑盒：比如：SystemBiosciences,MountainView,CA,ExoQuick等。研究表明，使用ExoQuick方法可以快速執(zhí)行，無需額外設(shè)備，只需用高速離心機進行超速離心可以獲得高產(chǎn)量的外泌體。但是此方法的缺點是：非外泌體材料對外泌體分離物的污染仍然是基于聚合物的分離方法的一個問題。此外，分離物中的聚合物可能會干擾下游分析。外泌體攜帶的小分子物質(zhì)（如ATP、GTP等）參與細(xì)胞生命活動、代謝、細(xì)胞生長和分化等生物學(xué)進程。濟南上清外泌體供貨商

外泌體分離方法之尺寸排阻色譜分離法：尺寸排阻色譜(SEC)用于根據(jù)尺寸而非分子量分離大分子。該技術(shù)應(yīng)用了一種填充有多孔聚合物珠子的柱子，該珠子含有多個孔和隧道。分子根據(jù)它們的直徑穿過珠子。小半徑分子通過色譜柱的孔遷移需要更長的時間，而大分子從色譜柱中洗脫得較早。尺寸排阻色譜可以精確分離大分子和小分子。此外，該方法可以應(yīng)用不同的洗脫溶液。與離心機離心方法相比，色譜分離具有較多的優(yōu)勢，因為通過色譜分離的外泌體不受剪切力的影響，避免了因剪切力所造成的囊泡結(jié)構(gòu)改變。目前，SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中存在的外泌體的技術(shù)。此外，SEC方法與超濾相結(jié)合已用于分離和分析尿源性外泌體。此外，流場-流分餾結(jié)合紫外分析儀和光散射檢測器已被應(yīng)用于分析外泌體的大小和純度。流場-流分餾結(jié)合拋物線和交叉流來分離外泌體。獲得的外泌體已通過電子顯微鏡和質(zhì)譜檢測。天津血液外泌體分離生產(chǎn)商外泌體不是干細(xì)胞，是干細(xì)胞較精華的部分。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時，量少。

CHO細(xì)胞外泌體的分離和表征：CHO細(xì)胞是一種普遍用于生物制藥蛋白質(zhì)生產(chǎn)的宿主。CHO細(xì)胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術(shù)從分批培養(yǎng)中分離和富集細(xì)胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過多種方法來檢測和表征分離的囊泡，這些分析包括動態(tài)光散射(DLS)和Zeta電位測量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標(biāo)記物分析、RNA和脂質(zhì)分析等。根據(jù)制造商的指南，使用TEI總外泌體分離試劑盒（Invitrogen）從培養(yǎng)基中分離外泌體。將細(xì)胞培養(yǎng)基以2000×g離心30分鐘以去除細(xì)胞和任何碎片；隨后將上清液小心移至離心管管中，加入0.5倍體積的TEI試劑，充分混合并在4°C下孵育過夜。然后將樣品在4°C下以10,000×g離心1小時，然后在棄去上清液后，將富含外泌體的顆粒重新懸浮在75μlPBS緩沖液中。然后將樣品儲存在-20°C下，直到需要進行后續(xù)分析。發(fā)現(xiàn)外泌體轉(zhuǎn)移可能為疾病治著和預(yù)后提供新的治著策略。

當(dāng)外泌體在1983年頭次被發(fā)現(xiàn)后，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運輸、細(xì)胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型，其可參與到機體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、疙瘩侵襲等方方面面。有研究表明疙瘩來源的外泌體參與到疙瘩細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進了疙瘩的生長與侵襲。優(yōu)化外泌體分離方法可以提高分離效率和分離精度。濟南上清外泌體供貨商

外泌體的組成成分包括脂肪、糖、蛋白質(zhì)等，對其組成成分的分析有助于了解其生物學(xué)功能和生理調(diào)節(jié)作用。濟南上清外泌體供貨商

通過對外泌體以及外泌體提取相關(guān)生物試劑的研究發(fā)現(xiàn)：外泌體除了蛋白質(zhì)，外泌體還含有RNA。外泌體miRNA可用于各種疙瘩的判斷。目前有八種miRNA被確定為卵巢病的標(biāo)志物。此外，據(jù)報道，肺腺病者的血清和疙瘩樣本中的miRNA會增加。前列腺病的血清中外泌體miRNAmiR-141和miR-375水平會升高。研究表明，外泌體miRNA-21的血清水平升高和miRNA-1246在ESCC群體中凸現(xiàn)。有趣的是，外泌體miRNA可能是腎纖維化和心血管癥的潛在判斷標(biāo)志物。對于進行型退行型疾病，在阿爾茨海默者的生物體液中發(fā)現(xiàn)了幾種miRNA，如：miR-9、miR-107、miRNA-128、miRNA134和miRNA-137miRNA124的高表達(dá)水平。濟南上清外泌體供貨商

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