RNA提取和DNA提取實(shí)驗(yàn)中常見問(wèn)題及過(guò)程中的注意事項(xiàng)：RNA提取和DNA提取實(shí)驗(yàn)在分子生物學(xué)中比較常用，但有時(shí)會(huì)出現(xiàn)產(chǎn)量低、純度低、易降解等情況，RNA提取和DNA提取實(shí)驗(yàn)中常見問(wèn)題：產(chǎn)量低：如果您遇到的DNA/RNA產(chǎn)量低于您對(duì)樣品的預(yù)期，則需要考慮許多因素。通常，這是一個(gè)裂解問(wèn)題。不完全裂解是產(chǎn)量低的主要原因。它也可能是由不正確的綁定條件引起的。確保使用新鮮的好的乙醇（100%200標(biāo)準(zhǔn)）稀釋緩沖液或添加到結(jié)合的步驟。劣質(zhì)乙醇或舊庫(kù)存可能已經(jīng)吸收了水分，并且濃度不正確。如果洗滌緩沖液制備不正確，您可能正在洗掉提取的DNA或RNA。RNA提取可以用于研究不同類型的RNA，例如mRNA、rRNA或miRNA。北京肺泡DNA提取公司

磁珠法提取DNA提取方法：洗滌：核酸的高電荷磷酸骨架使其比蛋白質(zhì)、多糖、脂肪等其他生物大分子物質(zhì)更具親水性，根據(jù)它們理化性質(zhì)的差異，用選擇性沉淀、層析、密度梯度離心等方法可將核酸分離、純化。用無(wú)水乙醇沉淀DNA，這是實(shí)驗(yàn)中較常用的沉淀DNA的方法。乙醇的優(yōu)點(diǎn)是可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會(huì)起任何化學(xué)反應(yīng)，對(duì)DNA很安全，因此是理性的沉淀劑。當(dāng)加入乙醇時(shí)，乙醇會(huì)奪去DNA周圍的水分子，使DNA失水而易于聚合。洗脫：加水或者EB破壞高鹽環(huán)境，形成低鹽環(huán)境，使DNA從磁珠上脫落。深圳血清DNA提取公司RNA提取是從細(xì)胞或組織中分離RNA的過(guò)程。

血漿DNA與血漿游離DNA提取試劑的選擇方法：游離DNA提取方法一般有TRizol方法、離心柱法、磁珠法。其中，Trizol方法與離心柱相比，提取效果相當(dāng)，但是因其對(duì)操作者帶來(lái)的毒性，現(xiàn)在越來(lái)越被棄用。磁珠法比較適合機(jī)器自動(dòng)化提取，如果沒有核酸提取儀，只是使用磁力架配套提取，磁珠法的操作就比較麻煩且容易導(dǎo)致樣本交叉污染。另外，根據(jù)研究，磁珠法的核酸提取得率不如離心柱法。如果要提取的游離核酸的量比較低，較好選擇離心柱法。對(duì)于游離DNA含量較低的樣本或比較珍貴的樣本或樣本總數(shù)不是很多的實(shí)驗(yàn)室，頭選的核酸提取方法應(yīng)是離心柱法。離心柱法游離DNA提取原理主要是樣本裂解后，游離DNA在高鹽條件下與硅膠膜結(jié)合，再在低鹽、高PH值時(shí)將DNA從硅膠膜上洗脫下來(lái)。

外泌體DNA提取過(guò)程：1、將吸附柱放入收集管內(nèi)，將700μL上述溶液轉(zhuǎn)入吸附柱內(nèi)，12,000rpm4℃離心1分鐘，棄收集管內(nèi)廢液；將剩余溶液轉(zhuǎn)移至吸附柱內(nèi)，12,000rpm4℃離心1分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。2、將吸附柱放回收集管內(nèi)，加500μL洗滌液A至吸附柱內(nèi)，靜置2分鐘，12,000rpm4℃離心1分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。3、將吸附柱放回收集管內(nèi)，加500μL洗滌液B至吸附柱內(nèi)，12,000rpm4℃離心1分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。4、按每份樣本40μL取洗脫液（如10份提取樣本，即取400μL洗脫液），放置于滅菌1.5mL離心管，65℃預(yù)熱。5、將吸附柱放回收集管內(nèi)，12,000rpm4℃離心2分鐘，離去殘留的洗滌液。6、取出吸附柱，放入新的1.5mL離心管內(nèi)，加入上述預(yù)熱的40μL洗脫液，靜置3分鐘，12,000rpm4℃離心1分鐘，收集DNA溶液。7、-20℃保存，或直接用于下一步實(shí)驗(yàn)。DNA提取的方法選擇應(yīng)根據(jù)樣品類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行調(diào)整。

骨組織RNA提取之其它骨組織破碎方法：a.取100mg骨組織加入1ml預(yù)熱的裂解液CLB（已加有P的LANTaid）高速均質(zhì)儀粉碎勻漿。或者取100mg液氮冷凍包埋切片粉碎的骨頭加入裂解液CLB（已加有P的LANTaid）粉碎勻漿。b.立刻接操作步驟的步驟。c.短時(shí)放回65°C水浴中（10min），中間偶爾顛倒1-2次幫助裂解。將裂解物4°C13,000rpm離心10分鐘，沉淀不能裂解的碎片。取裂解物上清（在不超過(guò)基因組DNA清理柱能力的情況下可以取更多的上清，這樣可以提高產(chǎn)量）轉(zhuǎn)到一個(gè)新離心管。加入上清體積一半的無(wú)水乙醇(0.5體積)，此時(shí)可能出現(xiàn)沉淀，但是不影響提取過(guò)程，立即吹打混勻，不要離心。若上清表面有漂浮物，用吸頭挑開吸取下面液體即可。將混合物(每次小于720μl，多可以分兩次加入)加入一個(gè)基因組清理柱中，（清理柱放入收集管中）13,000rpm離心2分鐘，棄掉廢液。RNA提取后可以進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增。腦脊液DNA提取生產(chǎn)商

DNA提取的原則，其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。北京肺泡DNA提取公司

RNA提取的一些問(wèn)題，RNA降解：提取的材料不新鮮。新鮮組織取得后應(yīng)立即置于液氮中或立即放入RNAstore試劑中，以保證提取效果。處理樣品量過(guò)大。污染了RNase。雖然試劑盒中提供的緩沖液都不含RNase，但使用過(guò)程中很容易污染RNase，應(yīng)小心操作。堿裂解法提取的質(zhì)粒DNA進(jìn)行瓊脂糖電泳進(jìn)行鑒定時(shí)，看到的三條帶分別是什么？堿法抽提得到質(zhì)粒樣品中不含線性DNA，得到的三條帶是以電泳速度的快慢排序的，分別是超螺旋、開環(huán)和復(fù)制中間體（即沒有復(fù)制完全的兩個(gè)質(zhì)粒連在了一起）。如果你不小心在溶液II加入后過(guò)度振蕩，會(huì)有第四條帶，這條帶泳動(dòng)得較慢，遠(yuǎn)離這三條帶，是20-100kb的大腸桿菌基因組DNA的片斷。北京肺泡DNA提取公司

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