外泌體的物理表征方法:常用的外泌體物理表征方法是基于顯微鏡的方法,例如透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡、低溫電子顯微鏡和原子力顯微鏡;動態光散射;納米粒子跟蹤分析;可調電阻脈沖傳感;和單個EV分析等。用于分析外泌體濃度、定量和概況的分子生物方法主要包括:實時定量PCR、數字PCR技術(基于芯片的dPCR、液滴數字PCR、ddPCR)、蛋白質免疫印跡、全基因組測序(next-generationsequencing)、exome-targetedsequencing(下一代測序)、微陣列圖譜技術和ELISA技術等。外泌體與肺的關系密切,通過氣道和肺泡微環境的打開和修飾,參與肺疾病如肺結核、肺病等的發生和發展。成都血漿外泌體分離報價表
外泌體的表征分析:動態光散射:使用Anton-PaarLightsizer500粒子分析儀測定外泌體制劑中的粒度分布。動態光散射測量由于溶液中粒子的布朗運動引起的散射光強度的動態波動,(685nm的激光,檢測角度為15、90、175度);較小的粒子比較大的粒子移動得更快。確定顆粒大小時,通常使用三種分布類型:(1)數量分布,報告不同大小“箱”中的顆粒數量;(2)體積分布報告不同尺寸類別的顆粒總體積;(3)強度分布,報告不同大小顆粒散射的光。也可以使用高分辨率納米粒徑分析儀NanocoulterⅠ來分析樣品中每種大小的囊泡的實際數量、濃度及粒子動態、Zeta電位等。為了進行分析,將先前儲存在-20°C的75μl等分試樣的外泌體制劑用925μlPBS稀釋(得到1ml)并轉移到一次性比色皿中用于DLS測量。成都血漿外泌體分離報價表外泌體的分離純化有助于其后續研究,例如外泌體功能的解析等。
差速離心法分離外泌體的實驗原理:任何外泌體分離方案旨在獲得產量合理且不受細胞碎片、細胞器和凋亡小體污染的外泌體群體,理想情況下,不含其他類型的細胞外囊泡、蛋白質及其聚集體。由于大小差異很大,將外泌體與細胞、細胞碎片和大囊泡分離相對容易。巨大的挑戰是從小的脫落囊泡中純化外泌體,因為它們的大小非常相似。通過差速離心分離這些細胞外囊泡既困難又低效。所以需要根據轉子的特性和要分離的顆粒的特性,來對離心參數應進行調整。因為離心速度與粒子的旋轉半徑成正比,所以離心運動加速。粒子的徑向坐標隨時間t呈指數增長。
在生物流體中發現的細胞外囊泡包括來自內體,多泡體的細胞外泌體(30nm至150nm)和來自質膜的微泡(150nm至1000nm)。目前已知有多種從生物體液中分離外泌體的方法除了使用高速離心機的離心分離法以外,還有色譜法、超濾過濾法、基于聚合物的沉淀和免疫分離法等。#外泌體干細胞#這些細胞外泌體分離方法提取的外泌體要警惕非外泌體顆粒污染,如凋亡小體、凋亡小囊泡、外泌體和脂蛋白,均會對獲得的外泌體生物活性產生影響。另外,分離方法也會影響細胞外泌體的純度和產量。如果要從培養基中分離外泌體,就要使用無血清培養基或無外泌體胎牛血清。外泌體介導的RNA轉移對基因表達水平和遺傳數據傳遞具有重要的調節作用。
外泌體的構成:除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯蛋白(包括膜聯蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9)、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素(不成熟的樹突狀細胞)。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶(烯醇化酶1,醛縮酶1,PKM2,PGK1,PDIA3,GSTP1,DPP4,AHCY,TPL1,抗氧化蛋白,P4HB,LDH,親環素A,FASN,MDH1和CNP)、核糖體蛋白(RPS3)、信號轉導因子(黑色素瘤分化相關因子,ARF1,CDC42,人類紅細胞膜整合蛋白,SLC9A3R1)、粘附因子(MFGE8、整合素)、細胞骨架蛋白以及泛素等。外泌體分離的方法會影響外泌體樣品的質量和數量。佛山組織提取外泌體分離制造商
外泌體攜帶的小分子物質(如ATP、GTP等)參與細胞生命活動、代謝、細胞生長和分化等生物學進程。成都血漿外泌體分離報價表
人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而打開細胞內的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA。成都血漿外泌體分離報價表
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