外泌體分離方法之免疫學(xué)分離方法：免疫學(xué)分離法是利用受位于外泌體膜中的選定蛋白質(zhì)標(biāo)記物影響的抗體對(duì)外泌體進(jìn)行標(biāo)記。這些標(biāo)記的外泌體可以進(jìn)一步輕松處理和純化，例如，使用微芯片或磁珠。磁分離后，外泌體被純化，磁珠被溶解和去除。通過(guò)這種簡(jiǎn)單快速的方法，就可以獲得較高純度提取物，但不會(huì)分離出缺乏磁性標(biāo)記抗體識(shí)別的表面標(biāo)記的外泌體，這可能導(dǎo)致外泌體池表現(xiàn)效果不佳。這種方法雖然既省時(shí)又直接，輸出純度較高，但也需要較為昂貴的試劑。外泌體的組成成分包括脂肪、糖、蛋白質(zhì)等，對(duì)其組成成分的分析有助于了解其生物學(xué)功能和生理調(diào)節(jié)作用。上海快速提取外泌體價(jià)格

外泌體分離方法之沉淀分離方法：：基于聚合物的沉淀分離方法是利用超親水聚合物來(lái)增強(qiáng)小尺寸顆粒（如外泌體）的沉淀。聚乙二醇的常用濃度在8%到15%之間變化。使用這種方法，將含有外泌體的溶液與聚合物一起孵育過(guò)夜，并在約10,000×g下進(jìn)一步離心。外泌體分離方法之FFF分離法：FFF目前是一種很少使用但前景不錯(cuò)的一種外泌體分離方法。分離由橫流力驅(qū)動(dòng)，并基于顆粒的分子量或流體動(dòng)力學(xué)直徑。它包括高純度、高效率和短時(shí)間處理，但迄今為止，F(xiàn)FF在外泌體分離中的使用案例較少，還有待進(jìn)一步開(kāi)發(fā)。上海快速提取外泌體價(jià)格外泌體攜帶的小分子物質(zhì)（如ATP、GTP等）參與細(xì)胞生命活動(dòng)、代謝、細(xì)胞生長(zhǎng)和分化等生物學(xué)進(jìn)程。

為了正確使用外泌體作為DDS，我們必須考慮外泌體的成分和它們的形成途徑。然后，還應(yīng)描述外泌體親和力和細(xì)胞攝取的特征。外泌體載體表現(xiàn)出不同的目的和功能，這要?dú)w功于外泌體作為基本的轉(zhuǎn)運(yùn)體本身就具有出色的特性。這可以用于細(xì)胞靶向，也可以作為藥物的額外增強(qiáng)。迄今為止，ExoCarta在外泌體中發(fā)現(xiàn)了大約10,000種蛋白質(zhì)、3500種mRNA和超過(guò)1100種不同的脂質(zhì)。對(duì)于系統(tǒng)審查，出現(xiàn)了許多很棒的數(shù)據(jù)庫(kù)，例如Vesiclepedia和ExoCarta，其中描述了外泌體分離程序和來(lái)源以及已識(shí)別的載體。

外泌體分離方法之過(guò)濾法：超濾膜也可用于外泌體的分離。根據(jù)微泡的大小，使用超濾膜過(guò)濾的方法可以將外泌體與蛋白質(zhì)和其他大分子分離。外泌體也可以通過(guò)多孔結(jié)構(gòu)捕獲它們來(lái)分離。常見(jiàn)的過(guò)濾膜孔徑為0.8m、0.45m或0.22m，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體。比如微柱多孔硅纖毛結(jié)構(gòu)一般用于分離40-100nm外泌體。在初始步驟中，去除較大的囊泡。在接下來(lái)的步驟中，外泌體會(huì)群集中在過(guò)濾膜上。隔離步驟相對(duì)較短，但該方法需要用PBS緩沖液對(duì)硅結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)孵育。除標(biāo)準(zhǔn)過(guò)濾技術(shù)外，切向流過(guò)濾在有效分離外泌體方面也有著嘗試應(yīng)用，通過(guò)切向流過(guò)濾技術(shù)去除游離肽和其他小化合物從而分離具有確定大小的外泌體。此外，在體外研究和脂肪組織中，也會(huì)采用超濾與SEC的結(jié)合的方式來(lái)分離外泌體。通過(guò)(a)對(duì)片上過(guò)濾器施加壓力或(b)產(chǎn)生電場(chǎng)，迫使外泌體穿過(guò)多孔膜，結(jié)合錯(cuò)流和電泳分選來(lái)完成篩分。外泌體來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)各種類型的囊泡，包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和細(xì)胞膜等。

外泌體是由正常或病理?xiàng)l件下的細(xì)胞所分泌，含有各種膜蛋白和胞質(zhì)蛋白。因此，外泌體蛋白也可以作為生物試劑潛在地用于蛋白診斷。外泌體中發(fā)現(xiàn)的十種蛋白質(zhì)主要包括熱休克蛋白8(HSPA8)、CD63抗原(CD63)、β肌動(dòng)蛋白(ACTB)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、烯醇化酶1α、細(xì)胞溶質(zhì)熱休克蛋白90α(HSP90AA1)、CD9、CD81、酪氨酸3-單加氧酶/色氨酸5-單加氧酶打開(kāi)蛋白、zeta多肽(YWHAZ)、肌肉酸激酶(PKM2)。外泌體蛋白屬于各種功能組，例如四跨膜蛋白（CD9、CD63和CD81）、熱休克蛋白（HSC70和HSC90）、膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（GTPases）和脂質(zhì)結(jié)合蛋白。外泌體標(biāo)記物及其在免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)和ELISA等抗體應(yīng)用中的常用的單克隆抗體。外泌體可以通過(guò)非典型途徑進(jìn)行排毒，參與細(xì)胞解掉毒和化學(xué)治著的作用。武漢血液RNA外泌體分離穩(wěn)定性好

外泌體可以傳遞生物分子，例如蛋白質(zhì)、DNA、mRNA等，影響接收器細(xì)胞的表現(xiàn)型和生理活性。上海快速提取外泌體價(jià)格

外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用：外泌體保護(hù)miRNA免于降解，使它們比游離miRNA更穩(wěn)定，并能被特定受體細(xì)胞有效整合。因此，在外泌體攜帶的貨物中，miRNA可以提供有關(guān)它們來(lái)源的細(xì)胞類型、靶標(biāo)和細(xì)胞狀態(tài)的身份信息。越來(lái)越多的證據(jù)表明，疙瘩細(xì)胞來(lái)源的外泌體已成為通過(guò)傳遞病miRNA促進(jìn)疙瘩細(xì)胞增殖、侵襲、血管生成、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和疙瘩微環(huán)境重塑的主要候選者。血管生成對(duì)于惡性疙瘩的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要，因?yàn)樾卵芸梢蕴峁╊~外的氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還可以清理廢物。比如：病細(xì)胞釋放外泌體exo-miR-21、exo-miR-23；外-miR-29；exo-miR-103和exo-miR-210可以促進(jìn)增殖、血管生成和疙瘩轉(zhuǎn)移。上海快速提取外泌體價(jià)格

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