使用差速離心法分離外泌體主要需要注意的是轉(zhuǎn)子的選擇。“擺動桶”(SW)轉(zhuǎn)子和“定角”(FA)轉(zhuǎn)子，這些轉(zhuǎn)子的幾何形狀根本不同，因此沉降特性也不同。這些轉(zhuǎn)子之間的主要區(qū)別在于：FA轉(zhuǎn)子，與旋轉(zhuǎn)半徑相比，沉積顆粒的較大路徑長度通常較小，允許近似恒定遷移率并簡化描述。然而，第二個區(qū)別是圓形FA管的水平橫截面是橢圓形的，不同粒子的路徑長度根據(jù)軌跡與橢圓長軸的距離而不同。由于較短的路徑長度，外面顆?？赡艹两档酶?，需要根據(jù)不同的實驗需要進行選擇。外泌體可通過血液或其他體液傳播，從而在遠(yuǎn)離原發(fā)灶的部位誘導(dǎo)細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移。合肥細(xì)胞外泌體報價表

外泌體的表征分析：動態(tài)光散射：使用Anton-PaarLightsizer500粒子分析儀測定外泌體制劑中的粒度分布。動態(tài)光散射測量由于溶液中粒子的布朗運動引起的散射光強度的動態(tài)波動，（685nm的激光，檢測角度為15、90、175度）；較小的粒子比較大的粒子移動得更快。確定顆粒大小時，通常使用三種分布類型：(1)數(shù)量分布，報告不同大小“箱”中的顆粒數(shù)量；(2)體積分布報告不同尺寸類別的顆?？傮w積；(3)強度分布，報告不同大小顆粒散射的光。也可以使用高分辨率納米粒徑分析儀NanocoulterⅠ來分析樣品中每種大小的囊泡的實際數(shù)量、濃度及粒子動態(tài)、Zeta電位等。為了進行分析，將先前儲存在-20°C的75μl等分試樣的外泌體制劑用925μlPBS稀釋（得到1ml）并轉(zhuǎn)移到一次性比色皿中用于DLS測量。合肥細(xì)胞外泌體報價表外泌體的分析需要根據(jù)不同來源的細(xì)胞選擇適宜的分離方法。

外泌體的表征方法之光學(xué)方法：目前，光學(xué)方法是外泌體表征的主要方法，即動態(tài)光散射(DLS)、多角度光散射(MALS)和納米粒子跟蹤分析(NTA)。這些方法允許對尺寸（DLS0.5–200nm；MALS10–500nm；NTA10–1000nm）、尺寸分布和濃度進行高分辨率測量。DLS和MALS的結(jié)合增加了測量范圍(0.5–500nm)和精度。光學(xué)方法比較受歡迎的，但缺點是靈敏度低、試劑消耗高以及需要昂貴的設(shè)備。在使用納米粒子跟蹤分析NTA方法過程中，熒光染料的加入也提高了分辨率，并允許通過使用熒光標(biāo)記來表征表面免疫表型。從而確定標(biāo)記物存在。

外泌體還參與神經(jīng)退行型癥。在神經(jīng)退行型癥個體的腦脊液和外周血中已檢測到幾種特定于阿爾茨海默氏癥、帕金森氏癥和Creutzfeldt-Jakob的聚集蛋白。特別是，在從阿爾茨海默者的腦脊液樣本中獲得的外泌體中檢測到Thr-181磷酸化的tau。在Thr-181磷酸化的Tau是阿爾茨海默的既定生物標(biāo)志物。此外，α-突觸核的蛋白也常在阿爾茨海默者的群體中檢出。此外，在尿液中發(fā)現(xiàn)的外泌體標(biāo)志物也可以是膀胱和前列腺疙瘩的標(biāo)志物。比如：視黃酸誘導(dǎo)蛋白3(GPRC5A)、抵抗素、外泌體蛋白PCA-3、TMPRSS2:ERG、α1-抗胰蛋白酶、組蛋白H2B1等。除了腦和泌尿道疙瘩外，外泌體蛋白也可以是胰腺病的標(biāo)志物。比如：結(jié)直腸病的外泌體蛋白標(biāo)志物包括EpCAM、cadherin-17、粘蛋白13(MUC-13)、角蛋白18、claudins和ephrinB1。發(fā)現(xiàn)外泌體轉(zhuǎn)移可能為疾病治著和預(yù)后提供新的治著策略。

差速離心法分離外泌體的實驗原理：外泌體是一種小的(40-100nm)細(xì)胞外膜囊泡，目前進行外泌體分離的普遍方法是差速離心法。應(yīng)用差速離心法和粒徑分析等是細(xì)胞外囊泡(EV)研究的重要步驟。已知細(xì)胞會分泌許多膜囊泡，這些囊泡的大小、分子含量及其形成機制各不相同具體取決于細(xì)胞的類型和當(dāng)前狀態(tài)。通?？梢员鎰e出三個主要的EV群體：凋亡小體、脫落的囊泡和外泌體.凋亡小體是已知較大的囊泡，直徑為800-5000nm，由凋亡后細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和質(zhì)膜成分組成。脫落的囊泡和外泌體由非凋亡細(xì)胞釋放。脫落的囊泡，也稱為“胞外體”或有時稱為“微泡”，是由質(zhì)膜起泡產(chǎn)生的，一般的粒徑尺寸范圍為(50–1000nm)。外泌體在人體的主要作用是充當(dāng)局部和全身信號和調(diào)節(jié)系統(tǒng)。無錫血液RNA外泌體生產(chǎn)商

蛋白質(zhì)分離方法可以用于外泌體的分離和純化。合肥細(xì)胞外泌體報價表

外泌體的表征方法之非光學(xué)方法：非光學(xué)方法主要包括掃描電子顯微鏡（SEM）、透射電子顯微鏡（TEM）、冷凍電子顯微鏡（Cryo-EM）、原子力顯微鏡（AFM）、免疫檢測方法（ELISA）、傅立葉變換紅外光譜（FTIR）、可調(diào)諧電阻脈沖傳感(TRPS)和單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)。SEM、TEM和AFM方法通常用于直接膜結(jié)構(gòu)和形態(tài)測定，而ELISA檢測提供各種結(jié)構(gòu)顆粒（主要是蛋白質(zhì)和受體）的檢測和量化，例如，用于外泌體形態(tài)的確認(rèn)。單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)也用于外泌體定量，但也可用于檢測特定標(biāo)記物和確定外泌體亞群。合肥細(xì)胞外泌體報價表

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