外泌體衍生物miRNA的重要應用：外泌體保護miRNA免于降解，使它們比游離miRNA更穩定，并能被特定受體細胞有效整合。因此，在外泌體攜帶的貨物中，miRNA可以提供有關它們來源的細胞類型、靶標和細胞狀態的身份信息。越來越多的證據表明，疙瘩細胞來源的外泌體已成為通過傳遞病miRNA促進疙瘩細胞增殖、侵襲、血管生成、遠處轉移和疙瘩微環境重塑的主要候選者。血管生成對于惡性疙瘩的生長和轉移至關重要，因為新血管可以提供額外的氧氣和營養物質，還可以清理廢物。比如：病細胞釋放外泌體exo-miR-21、exo-miR-23；外-miR-29；exo-miR-103和exo-miR-210可以促進增殖、血管生成和疙瘩轉移。部分外泌體分離方法可能存在對外泌體結構和元素的影響。天津血漿外泌體

外泌體分離方法之尺寸排阻色譜分離法：尺寸排阻色譜(SEC)用于根據尺寸而非分子量分離大分子。該技術應用了一種填充有多孔聚合物珠子的柱子，該珠子含有多個孔和隧道。分子根據它們的直徑穿過珠子。小半徑分子通過色譜柱的孔遷移需要更長的時間，而大分子從色譜柱中洗脫得較早。尺寸排阻色譜可以精確分離大分子和小分子。此外，該方法可以應用不同的洗脫溶液。與離心機離心方法相比，色譜分離具有較多的優勢，因為通過色譜分離的外泌體不受剪切力的影響，避免了因剪切力所造成的囊泡結構改變。目前，SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中存在的外泌體的技術。此外，SEC方法與超濾相結合已用于分離和分析尿源性外泌體。此外，流場-流分餾結合紫外分析儀和光散射檢測器已被應用于分析外泌體的大小和純度。流場-流分餾結合拋物線和交叉流來分離外泌體。獲得的外泌體已通過電子顯微鏡和質譜檢測。細胞外泌體分離公司外泌體的分離純化有助于其后續研究，例如外泌體功能的解析等。

外泌體的表征方法：根據藥物遞送系統(DDS)表征外泌體結構至關重要，因為它決定了DDS的特性，例如細胞或組織親和力、應激反應、吸收途徑和藥物釋放。2014年和2018年國際細胞外囊泡學會(MISEV2018)提出了外泌體（包括研究和外泌體制備）應滿足的基本要求指南。在開發基于外泌體的DDS時，必須考慮數量、大小、形態、膜組成和蛋白質（包括受體）等參數。這些參數表征所用的技術主要為光學、非光學和微流體技術。外泌體的表征方法之非光學方法：FTIR光譜和衰減全反射FTIR(ATR-FTIR)常用于外泌體質量量化和脂質和蛋白質含量的總體估計。使用TRPS，可以同時測量大小、濃度和zeta電位。由于掃描電子顯微鏡（SEM）、透射電子顯微鏡的成本較高，近些年來，一種新型的納米粒度分析儀器在外泌體研究領域迅速發展，比如：粒度分析儀可以不只可以進行單顆粒檢測，顆粒粒徑檢測還可以檢測細胞外泌體的濃度、zeta電位、形態等進行多維度檢測。

分離外泌體的方法之靜水過濾透析：它主要有助于將整個EV從高度稀釋的溶液中分離出來，而無需超速離心過程。280Musante等人展示了用于從尿液樣本中分離EV的HFD方案。在HFD的初始步驟中，用2000×g離心樣品以去除細胞，細菌和碎片作為沉淀。然后，將上清液保存在透析膜（1000kPa）中，1000kPa或更小的顆粒相應地以靜水壓差通過膜。較后，通過離心將外泌體囊泡沉降40,000×g。在HFD分離過程中，外泌體級分在早期階段恢復，與多步離心相比，這被認為是一個優勢。與超速離心相比，HFD也被認為是一種有效的方法。外泌體與胚胎學密切相關，參與人類胚胎發育和胚胎起始過程中的各種調節作用。

外泌體蛋白質特征是:膜結合四跨膜蛋白（CD9、CD63、CD81和CD82），以及常規用于分離的EpCAM和Rab5。其他公認的蛋白質是受體（CD46和CD55）、熱休克蛋白（HSP；Hsc70、Hsp70和Hsp90）、參與外泌體形成的蛋白質（Alix、TSG101）和負責融合和轉運的膜蛋白（GTP酶、膜聯蛋白和flotillin；ATP7A、ATP7B、MRP2、SLC1A4、SLC16A1和CLIC1)等。使用ELISA法檢測這些標記蛋白可以用于確認外泌體的存在。也有相關研究稱外泌體含有其他顆粒，如膽固醇（B淋巴細胞來源）、鞘脂、磷酸甘油酯和神經酰胺等。外泌體還運輸形態發生素（Hedgehog、Wingless和Wingless-like），參與黑腹果蠅所描述的組織模式發育。外泌體分離的過程需要進行多次洗滌和離心。天津血漿外泌體

外泌體受到多種因素的調控，例如細胞膜電位、氧化應激和信號轉導途徑等。天津血漿外泌體

外泌體分離方法之免疫學分離方法：免疫學分離法是利用受位于外泌體膜中的選定蛋白質標記物影響的抗體對外泌體進行標記。這些標記的外泌體可以進一步輕松處理和純化，例如，使用微芯片或磁珠。磁分離后，外泌體被純化，磁珠被溶解和去除。通過這種簡單快速的方法，就可以獲得較高純度提取物，但不會分離出缺乏磁性標記抗體識別的表面標記的外泌體，這可能導致外泌體池表現效果不佳。這種方法雖然既省時又直接，輸出純度較高，但也需要較為昂貴的試劑。天津血漿外泌體

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