microRNA富集方法(只提取microRNA,不包含>200nt其它總RNA成份。)1.按照前面標(biāo)準(zhǔn)操作步驟1-5操作,直到得到上清。2.較精確估計上清體積(約600μl),加入等體積70%乙醇(請先檢查是否已加入無水乙醇!)(必須是室溫的),渦旋或者吹打充分混勻,不要離心。3.將混合物加入一個吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)12,000rpm離心30-60秒,收集濾過物。將濾過物從收集管轉(zhuǎn)移到一個新的離心管后,把吸附柱子放回空的收集管內(nèi),再加入剩下的混合物,離心,收集濾過物。合并兩次濾過物,計算體積。此時,濾過物含有microRNA,吸附柱子上面是除去了microRNA的總RNA(不包含microRNA),如果需要,可以按照前面標(biāo)準(zhǔn)操作步驟8-11操作漂洗,洗脫回收得到去除了microRNA的總RNA。DNA提取需要使用化學(xué)試劑和設(shè)備,如離心機(jī)、研缽、酶等。廣州離心柱法DNA提取制造商
microRNA提取方法及步驟:近年來對RNA干擾和調(diào)節(jié)性小RNA的普遍研究迫切需要一種能有效提取15--30核苷酸左右大小RNA(包括siRNA和miRNA)的方法。但是傳統(tǒng)的RNA提取方法如硅膠膜不能有效吸附回收,酚/胍抽提和乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA。本方法采用獨(dú)特的裂解液/β-巰基乙醇迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶,強(qiáng)烈有機(jī)抽提去除蛋白和DNA,RNA包括微小分子RNA吸附于離心柱內(nèi)特殊硅基質(zhì)膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將細(xì)胞代謝物,蛋白等雜質(zhì)進(jìn)一步去除,較后低鹽的洗脫液將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。重慶磁珠法RNA提取DNA提取需要用冰冷的乙醇或異丙醇乙醇沉淀DNA。
DNA提取的幾種方法介紹,DNA提取的成功與否取決于樣品的質(zhì)量和實驗技術(shù)的熟練程度。苯酚抽提法:苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由于蛋白與DNA聯(lián)結(jié)鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相.離心分層后取出水層,多次重復(fù)操作,再合并含DNA的水相,利用核酸不溶于醇的性質(zhì),用乙醇沉淀DNA.此時DNA是十分黏稠的物質(zhì),可用玻璃漫漫繞成一團(tuán),取出.此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態(tài)。
microRNA提取方法及步驟:室溫放置5分鐘以充分分離核酸蛋白復(fù)合物。加入200μl氯仿,劇烈振蕩15秒。室溫放置2-3分鐘,13,000rpm離心10分鐘。小心取上清(約600μl)轉(zhuǎn)入到新的離心管,加入1.5倍體積的無水乙醇(必須是室溫的,通常900μl),渦旋混勻。此時可能出現(xiàn)沉淀,但是不影響提取過程,立即吹打混勻,不要離心,立刻接下步。將混合物(每次小于700μl,多可以分兩次加入)加入一個吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)12,000rpm離心30-60秒,棄掉廢液。加700μlWashSolution1(請先檢查是否已加入無水乙醇!),12,000rpm離心30秒,棄掉廢液。加入500μlWashSolution2/3(請先檢查是否已加入無水乙醇!),12,000rpm離心30秒,棄掉廢液。加入500μlWashSolution2/3,重復(fù)一遍。RNA提取的關(guān)鍵是避免RNA的降解和污染。
DNA提取方法:一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細(xì)胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速離心后取上清,所得DNA大小為100-150kb二.甲酰胺解聚法:破碎細(xì)胞同上,然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。三.玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細(xì)胞,將裂解物鋪于乙醇上,然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。四.異丙醇沉淀法:基本同1法,只用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態(tài))五.表面活性劑快速制備法:用TritonX-100A或NP40表面活性劑破碎細(xì)胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。六.加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,五分鐘,然后離心后取上清,可用于PCR反應(yīng)。七.堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和,離心后取上清,含少量DNA。DNA提取需要細(xì)胞裂解與細(xì)胞裂解緩沖液裂解細(xì)胞膜。廣州RNA提取生產(chǎn)廠家
RNA提取可以用于研究RNA的功能和相互作用。廣州離心柱法DNA提取制造商
磁珠法DNA提取試劑盒是納米技術(shù)、分子生物學(xué)技術(shù)、生物醫(yī)學(xué)技術(shù)和法醫(yī)學(xué)技術(shù)的綜合高科技產(chǎn)品。可普遍應(yīng)用于分子生物學(xué)中的基因組研究、分子進(jìn)化研究、醫(yī)學(xué)中遺傳病的研究、突變基因的檢測、腫的篩查、HPV等的檢測、HLA分型、移植配型等、法醫(yī)學(xué)生物樣本血斑、精斑、頭發(fā)、煙蒂等現(xiàn)場證物的檢測、和司法上的親子鑒定、血緣關(guān)系的鑒定等提供證據(jù)、考古學(xué)、大中小學(xué)的生物實驗等許多領(lǐng)域。磁珠法提取DNA試劑盒要比傳統(tǒng)的方法,例如:Chelex100法、有機(jī)法、二氧化硅法、鹽析法等更為簡單、方便,轉(zhuǎn)移離心管的次數(shù)較少,不易污染等。磁珠法在DNA純化、微量檢裁及PCR擴(kuò)增等方面是其它方法不可代替的。廣州離心柱法DNA提取制造商
蘇州英澤生物醫(yī)藥科技有限公司擁有生物醫(yī)藥和醫(yī)療領(lǐng)城內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓及相 關(guān)的技術(shù)服務(wù);化工原料及產(chǎn)品、生物儀器試劑(不含危化 品)、儀器儀表、電子產(chǎn)品的購銷;生物技 術(shù)推廣服務(wù);貨物或技術(shù)進(jìn)出口(國家禁止或涉及行政審批的 貨物和技術(shù)進(jìn)出口除外) (依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項目, 經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活 動) 一般項目:醫(yī)學(xué)研究和試驗發(fā)展;工業(yè)酶制劑研發(fā)(除依法須 能分準(zhǔn)機(jī)項目外等多項業(yè)務(wù),主營業(yè)務(wù)涵蓋RNA\DNA試劑盒,外泌體提取試劑盒,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,熒光定量PCR。目前我公司在職員工以90后為主,是一個有活力有能力有創(chuàng)新精神的團(tuán)隊。公司業(yè)務(wù)范圍主要包括:RNA\DNA試劑盒,外泌體提取試劑盒,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,熒光定量PCR等。公司奉行顧客至上、質(zhì)量為本的經(jīng)營宗旨,深受客戶好評。公司憑著雄厚的技術(shù)力量、飽滿的工作態(tài)度、扎實的工作作風(fēng)、良好的職業(yè)道德,樹立了良好的RNA\DNA試劑盒,外泌體提取試劑盒,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,熒光定量PCR形象,贏得了社會各界的信任和認(rèn)可。