RNA提取和DNA提取實驗中常見問題及過程中的注意事項：降解：降解問題是RNA制備中常常到的問題。因為在RNA提取過程中，樣品儲存不當或裂解效率低等情況都會導致降解。對于DNA提取，降解不是一個大問題，因為對于PCR，DNA可以被剪切并且工作正常，如果不希望有較多剪切的DNA，可以使用弱裂解的方法。PCR清理時的注意事項：PCR凈化其實并不是DNA提取技術本身，但它是一種效率高且簡單的技術，它只是添加高濃度的結合鹽（通常每體積PCR反應3-5體積鹽）和離心來過濾。在實驗過程中，PCRClean-up試劑盒出現故障也會導致整個實驗功虧一簣。因為在PCR反應中有較多吸收260度紫外線的物質，比如：核苷酸、去污劑、鹽和引物。所以，PCR凈化試劑盒經常無法正常工作可能是由于PCR反應失敗所造一般成較難清理。DNA提取的技術不斷發展，新的方法和設備不斷涌現。濰坊腦脊液RNA提取

什么是DNA提??？DNA提取是DNA的分離和純化過程。DNA可以從血液、冷凍組織樣本或石蠟組織塊中分離出來。DNA提取的三個步驟是細胞裂解、DNA分離和沉淀。在細胞裂解過程中，細胞膜和細胞核膜等細胞膜屏障會破裂，從而暴露DNA。下一步是從樣品中去除膜脂。較后，DNA的沉淀涉及通過蛋白酶去除DNA相關蛋白和通過RNase去除RNA。骨組織RNA提取的注意事項：不合適的儲存于低溫（4℃或者－20℃）會造成溶液沉淀，影響使用效果，因此運輸和儲存均在室溫下（15℃－25℃）進行。避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發、氧化、PH值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。濰坊腦脊液RNA提取DNA提取的步驟包括細胞破碎、DNA分離、純化和洗滌等。

RNA提取的一些問題，RNA降解：提取的材料不新鮮。新鮮組織取得后應立即置于液氮中或立即放入RNAstore試劑中，以保證提取效果。處理樣品量過大。污染了RNase。雖然試劑盒中提供的緩沖液都不含RNase，但使用過程中很容易污染RNase，應小心操作。堿裂解法提取的質粒DNA進行瓊脂糖電泳進行鑒定時，看到的三條帶分別是什么？堿法抽提得到質粒樣品中不含線性DNA，得到的三條帶是以電泳速度的快慢排序的，分別是超螺旋、開環和復制中間體（即沒有復制完全的兩個質粒連在了一起）。如果你不小心在溶液II加入后過度振蕩，會有第四條帶，這條帶泳動得較慢，遠離這三條帶，是20-100kb的大腸桿菌基因組DNA的片斷。

DNA提取方法：一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速離心后取上清，所得DNA大小為100-150kb二.甲酰胺解聚法：破碎細胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質與DNA的結合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。三.玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細胞，將裂解物鋪于乙醇上，然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。四.異丙醇沉淀法：基本同1法，只用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在異丙醇中可溶狀態）五.表面活性劑快速制備法：用TritonX-100A或NP40表面活性劑破碎細胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。六.加熱法快速制備：加熱96℃-100℃，五分鐘，然后離心后取上清，可用于PCR反應。七.堿變性快速制備：先用NaOH作用20分鐘，再加HCI中和，離心后取上清，含少量DNA。DNA提取的樣品準備之單層培養細胞：可用刮棒或胰酶消化后離心收集。

DNA提取的原則：1.保證核酸一級結構的完整性；2.核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子；3.其他生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染應降低到較低程度；4.其他核酸分子，如RNA，也應盡量去除。DNA提取的樣品準備：生物組織：一.較好新鮮組織，若不能馬上提取，應貯存-70℃或液氮。二.液氮冷凍敲碎研磨。三.組織勻漿法。四.液氮勻漿法。培養細胞：懸浮生長細胞：1500g離心，4℃10分種收集細胞。單層培養細胞：可用刮棒或胰酶消化后離心收集。血液樣品：血液樣品一.血液抗凝易用檸檬酸抗凝液（ACD）：檸檬酸0.48g；檸檬酸鈉1.32g；右旋葡萄糖1.47g加H2O至100ml，每6ml新鮮血液加1mlACD液零度保存數天，-70度長期貯存。RNA提取的關鍵是避免RNA的降解和污染。福州RNA提取報價

RNA提取可以使用不同的組織或細胞類型來比較RNA的表達。濰坊腦脊液RNA提取

microRNA提取方法及步驟：動物組織（例如鼠肝腦）a.新鮮組織用解剖刀迅速切成小碎塊,根據處理組織的質量，按照50-100mg加入1ml的比例加入Lysis/Bindingbuffer后電動或者手動徹底勻漿。或者在液氮中研磨組織成細粉后，取適量組織細粉（約50-100mg）轉入裝有1mlLysis/Bindingbuffer的1.5ml離心管中,劇烈吹打渦旋混勻。b.可選,一般不需要：如果處理量大,有明顯顆?；蛘卟蝗芪?非常粘稠或者裂解不充分,可立即用帶針頭的一次性5ml(約0.9mm針頭)注射器抽打裂解物10次或直到得到滿意勻漿結果(或者電動勻漿30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高產量。濰坊腦脊液RNA提取

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