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上海血液DNA外泌體報價

來源: 發布時間:2023-06-24

分離外泌體的方法之超濾:樣品通過0.2μm聚醚砜(PES)膜過濾,較大的顆粒物質(如細胞碎片和凋亡體)被滯留出來。然后,包括外泌體在內的半處理濾液樣品通過TFF系統通過500kDa截止濾芯進行超濾過程,進料流速為120mL/min,跨膜壓力<3.5psi跨膜壓力>10:1,外泌體太大而無法通過毛孔并保持保留。相反,包括游離蛋白在內的小分子通過中空纖維孔并作為滲透物洗脫并較終從過程中丟棄。為了獲得高質量的外泌體分離和純化,通過TFF連續重新濃縮截留物樣品,并去除小于500kDa的污染物。較后,將純化的外泌體重懸并儲存在-80°C的聚對苯二甲酸乙二醇(PETG)瓶中的0.1M蔗糖中,并用于所需的分析。通常,通過結合超濾加超速離心或離心加超濾等不同分離方法可以成功分離外泌體,使用較低孔徑的膜過濾和超速離心可提供純外泌體。分離過程中避免對外泌體結構和功能造成影響至關重要。上海血液DNA外泌體報價

外泌體分離方法之密度梯度離心法:這種方法將超速離心機的超速離心與蔗糖密度梯度相結合。具體地說,密度梯度離心用于將外泌體與非囊泡顆粒(例如蛋白質和蛋白質/RNA聚集體)分離。因此,該方法將囊泡與不同密度的顆粒分離。足夠的離心時間比較重要,否則如果外泌體部分具有相似的密度,則仍可能在外泌體部分中發現污染顆粒。該結構不會讓大于1μm的細胞和其他顆粒進入布線區域。一些較小的顆粒和細胞碎片可以進入微柱區域,但被納米纖毛排除,形成直徑為30-200nm的孔。纖毛結構選擇性地捕獲外泌體和小細胞外囊泡。肺泡外泌體企業發現外泌體轉移可能為疾病治著和預后提供新的治著策略。

外泌體衍生物miRNA的重要應用:miRNA是一類主要的小分子、單鏈、非編碼RNA分子,其成熟形式的長度在20到22個核苷酸(NT)之間,在幾乎所有生物途徑中發揮重要作用,包括細胞生長、增殖、分化、免疫反應,細胞凋亡,代謝和疙瘩發生。外泌體在體液中的主要作用是可以保護miRNA,防止其生物分子在非生理條件下(多次凍融循環、長期儲存和極端pH)降解。據報道,外泌體來源的miRNA在-20°C下可保持穩定長達5年,并且對凍融循環具有抵抗力.這也使外泌體成為病癥和其他疾病的潛在生物標志物。miRNA與包括病癥在內的許多疾病的發病機制有關,并且還被證明被遠端或附近的受體細胞吸收作為外泌體中的貨物,作為細胞間通訊的一種方法,可能會影響發病機制。所以,外泌體可以被看作是miRNA轉移至目標受體細胞的載體。

分離外泌體的方法之免疫親和相互作用:免疫親和法是利用外泌體表面蛋白(抗原)與其靶抗體或分離配體分子之間的免疫親和相互作用原理分離純外泌體的理想方法。它有助于根據其表面標志物分離特定類型的外泌體。基于微孔板的酶聯免疫吸附測定(ELISA)是免疫親和分離試劑盒的一個例子,用于根據外泌體表面標志物分離外泌體。Tetraspanin蛋白是這種分離方法的決定因素??笴D9、抗CD63和抗CD81是免疫親和外泌體分離中使用的抗體的常見示例。免疫親和法可用于從結腸病細胞中分離外泌體,其效率高于超速離心和密度梯度分離。另外還有一種外泌體分離方法,該方法采用抗體包被的基于磁性顆粒的技術來分離外泌體。外泌體可作為一種新型的疙瘩治著策略,例如外泌體特異性LncRNA干擾RNA技術。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進行下一步的實驗。二是PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態完整,純度較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養和體內注射。2016.9《ScientificReports》雜志發表了該方法較新數據,表明PS法可提取相當高純度的外泌體。未來可開發更加高效和精確的外泌體分離和檢測技術。泉州細胞外泌體分離生產商

外泌體作為一種重要的細胞通訊方式,在生物學和醫學研究中具有普遍的應用前景。上海血液DNA外泌體報價

外泌體分離方法之基于聚合物的沉淀法:基于聚合物的沉淀技術通常包括將生物流體與含聚合物的沉淀溶液混合、4℃孵育和低速離心。用于基于聚合物的沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。這種聚合物的沉淀可以對分離的外泌體產生溫和影響而且可以產生中性的pH值。由此,出現了幾種常見的外泌體試劑盒:比如:SystemBiosciences,MountainView,CA,ExoQuick等。研究表明,使用ExoQuick方法可以快速執行,無需額外設備,只需用高速離心機進行超速離心可以獲得高產量的外泌體。但是此方法的缺點是:非外泌體材料對外泌體分離物的污染仍然是基于聚合物的分離方法的一個問題。此外,分離物中的聚合物可能會干擾下游分析。上海血液DNA外泌體報價

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