外泌體的物理表征方法:常用的外泌體物理表征方法是基于顯微鏡的方法,例如透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡、低溫電子顯微鏡和原子力顯微鏡;動態光散射;納米粒子跟蹤分析;可調電阻脈沖傳感;和單個EV分析等。用于分析外泌體濃度、定量和概況的分子生物方法主要包括:實時定量PCR、數字PCR技術(基于芯片的dPCR、液滴數字PCR、ddPCR)、蛋白質免疫印跡、全基因組測序(next-generationsequencing)、exome-targetedsequencing(下一代測序)、微陣列圖譜技術和ELISA技術等。外泌體在心血管系統中扮演著重要的調節作用,與各種疾病如心肌梗死、心衰等相關聯。天津外泌體分離報價
分離外泌體的方法之超速離心:離心是一種利用不同的離心力根據顆粒成分的密度、大小和形狀沉淀顆粒成分的過程。超速離心是一種離心過程,較多使用6×106g離心力,有助于隔離更小的組件,例如,核糖體、蛋白質、病毒、外泌體和其他EV。加速度(g)、旋轉半徑、樣品粘度和沉降路徑長度是有效分離外泌體的決定因素。20至250nm之間的粒徑分數可以通過超速離心分離,隨后的離心或尺寸排阻過程產生所需的外泌體。超速離心法被認為是外泌體分離的金標準方法,外泌體需要1×105至2×105g離心1小時。在順序離心過程中,MVs、凋亡小體、細胞碎片、細胞和其他具有較高浮力密度的顆粒在外泌體之前沉淀。然而,必須注意的是,由于密度和大小重疊,大多數當前方法只能富集小EV(即外泌體)。武漢血液RNA外泌體蛋白檢測外泌體受到多種因素的調控,例如細胞膜電位、氧化應激和信號轉導途徑等。
外泌體分離方法之密度梯度離心法:這種方法將超速離心機的超速離心與蔗糖密度梯度相結合。具體地說,密度梯度離心用于將外泌體與非囊泡顆粒(例如蛋白質和蛋白質/RNA聚集體)分離。因此,該方法將囊泡與不同密度的顆粒分離。足夠的離心時間比較重要,否則如果外泌體部分具有相似的密度,則仍可能在外泌體部分中發現污染顆粒。該結構不會讓大于1μm的細胞和其他顆粒進入布線區域。一些較小的顆粒和細胞碎片可以進入微柱區域,但被納米纖毛排除,形成直徑為30-200nm的孔。纖毛結構選擇性地捕獲外泌體和小細胞外囊泡。
外泌體是由細胞分泌的包含RNA和蛋白質的小囊泡,普遍存在于血液、唾液、尿液及乳汁等體液中,具有細胞信使功能,參與細胞通訊。外泌體是目前為止定義較為明確的細胞外囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其生成過程、釋放途徑、大小及功能區別于微囊泡(Microvesicles)和凋亡小體(Apoptosisbodies)。外泌體是內吞起源的小(40–100nm)囊泡群。外泌體和脫落的囊泡都含有特定的蛋白質組、RNA和,dsDNA等。不同的細胞外環境富含不同類型的細胞外囊泡。即使由相同的細胞類型形成,不同類別的囊泡也具有不同的核酸特征。分離外泌體的方法:細胞碎片、凋亡體、外泌體和其他EV一起存在于生物體液中,具有密度、形狀、大小和表面蛋白等物理性質的外泌體是分離機制的基礎。結合兩種或多種分離方法有助于有效地將外泌體與其他干擾成分分離。外泌體作為一種重要的細胞通訊方式,在生物學和醫學研究中具有普遍的應用前景。
使用差速離心法分離外泌體主要需要注意的是轉子的選擇。“擺動桶”(SW)轉子和“定角”(FA)轉子,這些轉子的幾何形狀根本不同,因此沉降特性也不同。這些轉子之間的主要區別在于:FA轉子,與旋轉半徑相比,沉積顆粒的較大路徑長度通常較小,允許近似恒定遷移率并簡化描述。然而,第二個區別是圓形FA管的水平橫截面是橢圓形的,不同粒子的路徑長度根據軌跡與橢圓長軸的距離而不同。由于較短的路徑長度,外面顆粒可能沉降得更快,需要根據不同的實驗需要進行選擇。不同來源的外泌體可能需要采用不同的離心參數和分離方法。天津血液DNA外泌體哪家好
外泌體的純化可以通過單顆粒色譜等技術實現。天津外泌體分離報價
分離外泌體的方法之微流控分離:基于微流體的外泌體分離可以包括用于外泌體捕獲的免疫親和方法,納米多孔膜篩分方法或微柱上的納米線用于外泌體捕獲。所有三個系統都需要具有粘彈性分析和電操作的芯片才能進行外泌體分離過程。外泌體的特異性很高,采用基于微流控芯片的免疫親和捕獲方法。尺寸范圍在40-100nm之間的外泌體被這種微流體芯片特異性地捕獲,在外泌體分離和定量方面的益處。篩分方法可用于通過壓力或通過電泳從全血中過濾外泌體,壓力的利用使分離時間更短,電場導致高外泌體純度。特異性、可重復性、低分離時間和更低的分離成本是基于微流體的外泌體分離的一些優點。天津外泌體分離報價
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