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來源: 發布時間:2023-08-26

外泌體的表征方法:根據藥物遞送系統(DDS)表征外泌體結構至關重要,因為它決定了DDS的特性,例如細胞或組織親和力、應激反應、吸收途徑和藥物釋放。2014年和2018年國際細胞外囊泡學會(MISEV2018)提出了外泌體(包括研究和外泌體制備)應滿足的基本要求指南。在開發基于外泌體的DDS時,必須考慮數量、大小、形態、膜組成和蛋白質(包括受體)等參數。這些參數表征所用的技術主要為光學、非光學和微流體技術。外泌體的表征方法之非光學方法:FTIR光譜和衰減全反射FTIR(ATR-FTIR)常用于外泌體質量量化和脂質和蛋白質含量的總體估計。使用TRPS,可以同時測量大小、濃度和zeta電位。由于掃描電子顯微鏡(SEM)、透射電子顯微鏡的成本較高,近些年來,一種新型的納米粒度分析儀器在外泌體研究領域迅速發展,比如:粒度分析儀可以不只可以進行單顆粒檢測,顆粒粒徑檢測還可以檢測細胞外泌體的濃度、zeta電位、形態等進行多維度檢測。外泌體可以通過非典型途徑進行排毒,參與細胞解掉毒和化學治著的作用。成都血液DNA外泌體多少錢

CHO細胞外泌體的分離和表征:CHO細胞是一種普遍用于生物制藥蛋白質生產的宿主。CHO細胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術從分批培養中分離和富集細胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過多種方法來檢測和表征分離的囊泡,這些分析包括動態光散射(DLS)和Zeta電位測量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標記物分析、RNA和脂質分析等。根據制造商的指南,使用TEI總外泌體分離試劑盒(Invitrogen)從培養基中分離外泌體。將細胞培養基以2000×g離心30分鐘以去除細胞和任何碎片;隨后將上清液小心移至離心管管中,加入0.5倍體積的TEI試劑,充分混合并在4°C下孵育過夜。然后將樣品在4°C下以10,000×g離心1小時,然后在棄去上清液后,將富含外泌體的顆粒重新懸浮在75μlPBS緩沖液中。然后將樣品儲存在-20°C下,直到需要進行后續分析。血液DNA外泌體RT-qPCR外泌體攜帶的小分子物質(如ATP、GTP等)參與細胞生命活動、代謝、細胞生長和分化等生物學進程。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式:一是色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。二是微流控分離法,該方法通過負壓及震蕩等機械原理分離外泌體,產量純度均具有較大幅度提高,但需要特定設備配合。外泌體分離方法之納米粒徑分析法:確定性橫向位移依賴于顆粒流動路徑的變化,而顆粒流動路徑取決于顆粒尺寸。這種方法雖然比較簡單,但是需要使用掃描電鏡技術、動態光散射技術、納米粒子跟蹤分析技術、單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)技術等。對于外泌體大小、形態、外泌體的濃度、zeta電位等分析也可以使用粒度分析儀。

人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而打開細胞內的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA。外泌體被發現在各種生物體中,包括哺乳動物、植物和微生物。

外泌體分離方法之尺寸排阻層析法:尺寸排阻層析法也被稱為凝膠過濾層析法,這種方法是基于凝膠孔的大小和外泌體的大小,大于凝膠孔徑的顆粒被洗脫;反之,小于凝膠孔徑的顆粒將被抑制。凝膠過濾層析分離法總體上能獲得較高的純度和產量。建議與超濾相結合,這種方法可提供更少的蛋白質污染和更高的外泌體回收率。凝膠過濾層析分離法的缺點是凝膠的成本過高。外泌體分離方法之聲學流體分離:聲學流體分離技術利用聲場根據粒子的大小、密度和可壓縮性來分離粒子。生物樣品在此過程中不會受到損壞,并且分離的本身是非接觸式、高效的和無標記的。外泌體的構成:外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。血液DNA外泌體RT-qPCR

外泌體在心血管系統中扮演著重要的調節作用,與各種疾病如心肌梗死、心衰等相關聯。成都血液DNA外泌體多少錢

分離外泌體的方法之降水:它是一種基于生物體液中外泌體的電荷沉淀的方法。帶負電荷的外泌體可以與PEG35,000Da基質中帶正電荷的魚精蛋白相互作用并形成沉淀。外泌體的回收和重懸比基于超速離心的分離更有效。聚合物沉淀法以更少的勞動力和昂貴的設備分離尿外泌體的潛在益處。該方法首先利用DL-二硫蘇糖醇溶液還原或去除Tamm-Horsfall蛋白的聚合網絡,然后在25°C和30min下只用10,000×g的向心力即可實現外泌體的沉淀。還有利用聚合物沉淀方法并消除超速離心的商業試劑盒。ExoQuick?、Exo-spin?是來自Invitrogen?和miRCURY?的市售總外泌體分離試劑。成都血液DNA外泌體多少錢

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