RNA逆轉錄實驗注意事項：RNA定量：除了掌握RNA的完整性之外，反轉錄之前還需要對RNA濃度進行測定。一般反轉錄試劑盒會對上樣量有要求，建議totalRNA上樣量小于5μg。超過這個范圍，會使反轉錄產物產生偏好性(表達豐度高的基因優先被反轉錄)而造成定量結果不準確。逆轉錄引物的選擇：逆轉錄引物一般包含3種：oligodT引物，隨機引物和特異性引物。對于短的且不具備發卡結構的真核細胞mRNA，三種都可用。逆轉錄實驗過程中避免光照，防止RNA樣品和試劑受光降解或刺激。逆轉錄PCR在檢測病毒、診斷疾病等方面有普遍應用。逆轉錄酶報價

逆轉錄的端粒復制：對于線性基因組，其滯后鏈的末端是無法完整復制的，每次約損失30-200個核苷酸（Cells.2020Feb22;9(2).）。這樣隨著細胞分裂，端粒會持續縮短，造成復制性衰老。對于大多數體細胞來說，端粒磨損是一種控制其分裂潛力的機制，但對于需要多次增殖的干細胞來說，必須設法維持端粒長度。端粒酶（telomerase）可以通過逆轉錄過程延長端粒。端粒酶由端粒酶RNA（TERC）和端粒酶逆轉錄酶（TERT）組成。TERT使用TERC作為模板，在染色體的單鏈末端合成端粒DNA的重復序列。大多數體細胞缺乏端粒酶活性，因而容易衰老。但未分化的生殖細胞，干細胞，活化的淋巴細胞和大多數疙瘩細胞具有高水平的端粒酶活性，可以克服端粒磨損并維持無限的細胞分裂。上海一步法反轉錄價格逆轉錄實驗后的DNA的片段可用于測序等高通量技術。

RT-PCR逆轉錄引物設計原則：1.上下游引物要保守：擴增子長度需選擇一段保守片段（100-200bp）進行PCR擴增，選擇片段需跨越內含子，因內含子的基因組DNA序列不會被擴增，也可減少從污染的基因組DNA中擴增得到的假陽性風險。引物選取同樣需要保守。2.引物長度和Tm值：引物設計長度為18-25bp，Tm值在50-65℃之間，引物中GC含量在40-60%。設計引物時盡量避免出現4個或超過4個G堿基。RT-PCR實驗陰性對照：反轉錄陰性對照應包括在所有的RT-PCR的實驗中，用來檢測DNA是否污染（如基因組DNA或PCR產物）。該對照所指不加反轉錄酶，通過反轉錄過程得到cDNA在進行熒光定量PCR檢測。如檢測到擴增，則樣本中可能含有基因組DNA污染。

逆轉錄過程是病毒的復制形式之一，如RNA病毒中的逆轉錄病毒，DNA病毒中的擬逆轉錄病毒的復制均需要經過逆轉錄。逆轉錄過程在真核細胞中也同樣存在，例如逆轉座子和端粒DNA的延長均存在逆轉錄過程，需逆轉錄酶的催化，端粒酶即為真核細胞中的逆轉錄酶。逆轉錄過程的揭示是分子生物學研究中的重大發現，是對中心法則的重要修正和補充。人們通過體外模擬該過程，以樣本中提取的mRNA為模板，在逆轉錄酶的作用下，合成出互補的cDNA，構建cDNA文庫，并從中篩選特異的目的基因。該方法已成為基因工程技術中較常用的獲得目的基因的策略之一。逆轉錄PCR是較常用的逆轉錄應用之一。

反轉錄酶的用處：由它催化轉錄合成的DNA稱為互補DNA(cDNA)。通常情況下，細胞內的轉錄應由DNA到RNA的，所得RNA為信使RNA（mRNA）供蛋白質合成作模板用。而在部分RNA病毒中，要實現自身擴增，必須具有DNA，因此先由RNA逆轉錄合成cDNA再由cDNA轉錄出RNA。逆轉錄酶可用RT—PCR，將RNA轉變為DNA后擴增，以獲得RNA的序列。1970年從致死RNA病毒中發現了反轉錄酶，并認為此酶與病毒的致死性質有關。反轉錄酶也分布于某些正常細胞和胚胎細胞。反轉錄酶的發現表明不能把生物的遺傳信息由DNA→mRNA→蛋白質非常化，遺傳信息也可以從RNA傳遞到DNA。它促進了分子生物學、生物化學和病毒學的研究，已成為研究這些學科的有力工具。逆轉錄的反應條件和反應體系的優化十分重要。逆轉錄酶報價

HIV病毒復制的一個重要步驟就是逆轉錄。逆轉錄酶報價

miRNA加尾法逆轉錄：miRNA加尾法利用基因組中壓縮miRNA元件，通過識別不同轉錄起始位置，將miRNA連接到其前體mRNA上這種方法可以注意到與miRNA相關的各種信息，例如miRNA功能特異性，miRNA的轉錄條件和miRNA的表達量等。miRNA的逆轉錄允許科學家們用特定的miRNA測序技術來節省時間。miRNA逆轉錄，可以檢測miRNA的表達以及miRNA與RNA的瓦作關系，還可以檢測miRNA的調節的位點。同樣，miRNA表達量的研究也能夠通過miRNA逆轉錄來進行，從而幫助我們更好地了解miRNA在細胞信號轉導中發揮著重要作用。逆轉錄酶報價