細(xì)胞外泌體的來(lái)源和表征方法：細(xì)胞外泌體是直徑為30-150nm的血管外囊泡亞群。在過(guò)去的20年里，科學(xué)家已經(jīng)從包括正常細(xì)胞和病細(xì)胞在內(nèi)的許多細(xì)胞類型中分離出外泌體，并且研究了它們對(duì)其他細(xì)胞的影響。外泌體是由多種大分子組成，例如核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。細(xì)胞外泌體具有天然的特定細(xì)胞靶向特性，通常被設(shè)計(jì)用于靶向大分子（DNA和RNA）和藥物遞送系統(tǒng)（多柔比星、紫杉醇和紫杉醇）。目前常用細(xì)胞外泌體的分離方法主要是超速離心法、密度梯度離心法、超濾分離法、基于聚合物的沉淀法、親和沉淀分離法、免疫磁珠法和色譜法等。外泌體不是干細(xì)胞，是干細(xì)胞較精華的部分。杭州組織提取外泌體分離生產(chǎn)商

分離外泌體的方法之密度梯度超速離心：有助于根據(jù)尺寸、結(jié)構(gòu)和形態(tài)差異分離和分析納米級(jí)材料。DGUC“細(xì)化”分離的囊泡，并使用密度為1.07g/mL或更低的密度梯度培養(yǎng)基。水中碘沙醇、冰冷的PBS和蔗糖是用于外泌體分離的常見梯度培養(yǎng)基。有市售的碘沙醇密度梯度分餾膜，用于將外泌體與非囊泡成分分離。將生物懸浮液添加到梯度培養(yǎng)基中，并以完整的梯度分層組分。DGUC有助于分離具有相同梯度的樣品。凋亡小體、蛋白質(zhì)聚集體和其他非外泌體微囊泡可能通過(guò)超速離心干擾較終分離的外泌體產(chǎn)物。DGUC有助于克服超速離心的局限性，并提供較純凈的外泌體。DGUC在精細(xì)化和高性能外泌體分離方法中的應(yīng)用。簡(jiǎn)而言之，在分離細(xì)胞碎片后，應(yīng)用1×105g用60%碘沙醇離心3小時(shí)，然后用1×10離心5用40%碘沙醇g18小時(shí)有助于形成多達(dá)12個(gè)碘沙醇梯度級(jí)分和兩個(gè)外泌體級(jí)分。超速離心使用連續(xù)的密度梯度或逐步梯度來(lái)較小化這些顆粒材料對(duì)外泌體的干擾。血液外泌體分離生產(chǎn)廠家可將不同分離方法結(jié)合使用，以提高外泌體分離的效率和分離精度。

差速離心法分離外泌體的實(shí)驗(yàn)原理：與等密度和梯度離心相反，差速離心從離心管內(nèi)顆粒的均勻初始分布開始。在開始一輪離心過(guò)程中，位于管底部附近的一部分目標(biāo)小顆粒不可避免地與較大顆粒共同沉淀。這種共沉淀導(dǎo)致較小顆粒的產(chǎn)量降低。然而，選擇大顆粒，起初位于管半月板附近，在開始一輪離心過(guò)程中可能沒有足夠的時(shí)間到達(dá)管底，從而污染較后一個(gè)離心步驟產(chǎn)生的小顆粒顆粒。顯然，交叉污染的程度取決于不同粒子群的相對(duì)沉降速度和離心條件。在被分離的粒子的沉降速度之間存在顯著（數(shù)量級(jí)）差異的情況下，可以有效地優(yōu)化差速離心協(xié)議以獲得目標(biāo)粒子群的高產(chǎn)量和足夠純度。此外，當(dāng)不同顆粒部分之間的沉降速率只存在微小差異時(shí)，優(yōu)化過(guò)程不太成功。在這些情況下，取決于離心條件。

外泌體是由正?；虿±?xiàng)l件下的細(xì)胞所分泌，含有各種膜蛋白和胞質(zhì)蛋白。因此，外泌體蛋白也可以作為生物試劑潛在地用于蛋白診斷。外泌體中發(fā)現(xiàn)的十種蛋白質(zhì)主要包括熱休克蛋白8(HSPA8)、CD63抗原(CD63)、β肌動(dòng)蛋白(ACTB)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、烯醇化酶1α、細(xì)胞溶質(zhì)熱休克蛋白90α(HSP90AA1)、CD9、CD81、酪氨酸3-單加氧酶/色氨酸5-單加氧酶打開蛋白、zeta多肽(YWHAZ)、肌肉酸激酶(PKM2)。外泌體蛋白屬于各種功能組，例如四跨膜蛋白（CD9、CD63和CD81）、熱休克蛋白（HSC70和HSC90）、膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（GTPases）和脂質(zhì)結(jié)合蛋白。外泌體標(biāo)記物及其在免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)和ELISA等抗體應(yīng)用中的常用的單克隆抗體。外泌體在人體的主要作用是充當(dāng)局部和全身信號(hào)和調(diào)節(jié)系統(tǒng)。

外泌體的表征方法之非光學(xué)方法：非光學(xué)方法主要包括掃描電子顯微鏡（SEM）、透射電子顯微鏡（TEM）、冷凍電子顯微鏡（Cryo-EM）、原子力顯微鏡（AFM）、免疫檢測(cè)方法（ELISA）、傅立葉變換紅外光譜（FTIR）、可調(diào)諧電阻脈沖傳感(TRPS)和單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)。SEM、TEM和AFM方法通常用于直接膜結(jié)構(gòu)和形態(tài)測(cè)定，而ELISA檢測(cè)提供各種結(jié)構(gòu)顆粒（主要是蛋白質(zhì)和受體）的檢測(cè)和量化，例如，用于外泌體形態(tài)的確認(rèn)。單粒子干涉反射成像傳感器(SP-IRIS)也用于外泌體定量，但也可用于檢測(cè)特定標(biāo)記物和確定外泌體亞群。外泌體可以通過(guò)非典型途徑進(jìn)行排毒，參與細(xì)胞解掉毒和化學(xué)治著的作用。佛山組織提取外泌體穩(wěn)定性好

外泌體的轉(zhuǎn)移涉及細(xì)胞因子、基質(zhì)降解酶和細(xì)胞外基質(zhì)重塑等多種調(diào)節(jié)步驟。杭州組織提取外泌體分離生產(chǎn)商

外泌體是由細(xì)胞分泌的包含RNA和蛋白質(zhì)的小囊泡，普遍存在于血液、唾液、尿液及乳汁等體液中，具有細(xì)胞信使功能，參與細(xì)胞通訊。外泌體是目前為止定義較為明確的細(xì)胞外囊泡(ExtracellularVesicles,EVs)，其生成過(guò)程、釋放途徑、大小及功能區(qū)別于微囊泡(Microvesicles)和凋亡小體(Apoptosisbodies)。外泌體是內(nèi)吞起源的小(40–100nm)囊泡群。外泌體和脫落的囊泡都含有特定的蛋白質(zhì)組、RNA和,dsDNA等。不同的細(xì)胞外環(huán)境富含不同類型的細(xì)胞外囊泡。即使由相同的細(xì)胞類型形成，不同類別的囊泡也具有不同的核酸特征。分離外泌體的方法：細(xì)胞碎片、凋亡體、外泌體和其他EV一起存在于生物體液中，具有密度、形狀、大小和表面蛋白等物理性質(zhì)的外泌體是分離機(jī)制的基礎(chǔ)。結(jié)合兩種或多種分離方法有助于有效地將外泌體與其他干擾成分分離。杭州組織提取外泌體分離生產(chǎn)商