外泌體分離方法之基于聚合物的沉淀法：基于聚合物的沉淀技術(shù)通常包括將生物流體與含聚合物的沉淀溶液混合、4℃孵育和低速離心。用于基于聚合物的沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。這種聚合物的沉淀可以對分離的外泌體產(chǎn)生溫和影響而且可以產(chǎn)生中性的pH值。由此，出現(xiàn)了幾種常見的外泌體試劑盒：比如：SystemBiosciences,MountainView,CA,ExoQuick等。研究表明，使用ExoQuick方法可以快速執(zhí)行，無需額外設(shè)備，只需用高速離心機進行超速離心可以獲得高產(chǎn)量的外泌體。但是此方法的缺點是：非外泌體材料對外泌體分離物的污染仍然是基于聚合物的分離方法的一個問題。此外，分離物中的聚合物可能會干擾下游分析。外泌體的定量檢測和分析可作為疾病診斷和治著中的新型指標(biāo)。南京外泌體分離測序

外泌體蛋白質(zhì)特征是:膜結(jié)合四跨膜蛋白（CD9、CD63、CD81和CD82），以及常規(guī)用于分離的EpCAM和Rab5。其他公認(rèn)的蛋白質(zhì)是受體（CD46和CD55）、熱休克蛋白（HSP；Hsc70、Hsp70和Hsp90）、參與外泌體形成的蛋白質(zhì)（Alix、TSG101）和負(fù)責(zé)融合和轉(zhuǎn)運的膜蛋白（GTP酶、膜聯(lián)蛋白和flotillin；ATP7A、ATP7B、MRP2、SLC1A4、SLC16A1和CLIC1)等。使用ELISA法檢測這些標(biāo)記蛋白可以用于確認(rèn)外泌體的存在。也有相關(guān)研究稱外泌體含有其他顆粒，如膽固醇（B淋巴細(xì)胞來源）、鞘脂、磷酸甘油酯和神經(jīng)酰胺等。外泌體還運輸形態(tài)發(fā)生素（Hedgehog、Wingless和Wingless-like），參與黑腹果蠅所描述的組織模式發(fā)育。南京外泌體分離測序不同來源的外泌體可能需要采用不同的離心參數(shù)和分離方法。

外泌體分離方法之沉淀分離方法：：基于聚合物的沉淀分離方法是利用超親水聚合物來增強小尺寸顆粒（如外泌體）的沉淀。聚乙二醇的常用濃度在8%到15%之間變化。使用這種方法，將含有外泌體的溶液與聚合物一起孵育過夜，并在約10,000×g下進一步離心。外泌體分離方法之FFF分離法：FFF目前是一種很少使用但前景不錯的一種外泌體分離方法。分離由橫流力驅(qū)動，并基于顆粒的分子量或流體動力學(xué)直徑。它包括高純度、高效率和短時間處理，但迄今為止，F(xiàn)FF在外泌體分離中的使用案例較少，還有待進一步開發(fā)。

外泌體分離方法之尺寸排阻層析法：尺寸排阻層析法也被稱為凝膠過濾層析法，這種方法是基于凝膠孔的大小和外泌體的大小，大于凝膠孔徑的顆粒被洗脫；反之，小于凝膠孔徑的顆粒將被抑制。凝膠過濾層析分離法總體上能獲得較高的純度和產(chǎn)量。建議與超濾相結(jié)合，這種方法可提供更少的蛋白質(zhì)污染和更高的外泌體回收率。凝膠過濾層析分離法的缺點是凝膠的成本過高。外泌體分離方法之聲學(xué)流體分離：聲學(xué)流體分離技術(shù)利用聲場根據(jù)粒子的大小、密度和可壓縮性來分離粒子。生物樣品在此過程中不會受到損壞，并且分離的本身是非接觸式、高效的和無標(biāo)記的。外泌體的組成成分包括脂肪、糖、蛋白質(zhì)等，對其組成成分的分析有助于了解其生物學(xué)功能和生理調(diào)節(jié)作用。

外泌體（細(xì)胞外囊泡）目前被認(rèn)為是通過生物活性脂質(zhì)、蛋白質(zhì)以及RNA來進行細(xì)胞之間的通訊，同樣外泌體也是目前研究較深入的細(xì)胞外囊泡，外泌體的直徑只有我們頭發(fā)直徑的百萬分之一（30~150nm），當(dāng)多泡體與細(xì)胞膜融合時釋放到細(xì)胞外的時候，富含許多生物活性分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、轉(zhuǎn)移RNA以及微小RNA等就會被外泌體被釋放到細(xì)胞外，這樣一來就可以被微環(huán)境中的靶細(xì)胞吸收并且通過通過生物體液運送到遠處。而外泌體與“目標(biāo)”進行交流方式主要有兩種途徑，一是通過胞吞作用被攝入到細(xì)胞內(nèi)；二是通過膜融合的方式來與靶細(xì)胞膜進行融合，接著就會直接釋放其中含有的物質(zhì)以及信息至靶標(biāo)細(xì)胞，其實外泌體的作用形式是相互的靶細(xì)胞分泌含有細(xì)胞特異性RNA的外泌體作用于周圍細(xì)胞后可誘導(dǎo)其表型重組而獲得組織特異性的表型，而周圍細(xì)胞分泌的外泌體則可以通過調(diào)控蛋白表達來調(diào)控細(xì)胞的生理過程。外泌體的高純度分離是外泌體研究的基礎(chǔ)。南京外泌體分離測序

的外泌體分離技術(shù)采用了磁珠分離和濾膜分離的方法。南京外泌體分離測序

外泌體通常被認(rèn)為是細(xì)胞間信號分子，包含許多蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞因子、轉(zhuǎn)錄因子和其他細(xì)胞來源的顆粒。外泌體不只可以向局部環(huán)境傳遞信息，還可以向距離很遠的細(xì)胞和組織傳遞信息。這可能作為一般信號和通信通路，但也可能參與致病基因擴散和惡性疙瘩進一步惡化。迄今為止，已證實外泌體存在于體液中，例如羊水、血清、母乳、附睪液、唾液、尿液、腹水和胸腔積液、支氣管肺泡灌洗液、滑液和體外細(xì)胞培養(yǎng)上清液中。細(xì)胞排出的外泌體也可作為去除不必要的蛋白質(zhì)和核酸的一種方式，例如，在細(xì)胞成熟（網(wǎng)織紅細(xì)胞）或排泄系統(tǒng)（腎的內(nèi)臟和小管）期間的外泌體。南京外泌體分離測序