外泌體分離方法之過濾法:超濾膜也可用于外泌體的分離。根據微泡的大小,使用超濾膜過濾的方法可以將外泌體與蛋白質和其他大分子分離。外泌體也可以通過多孔結構捕獲它們來分離。常見的過濾膜孔徑為0.8m、0.45m或0.22m,可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體。比如微柱多孔硅纖毛結構一般用于分離40-100nm外泌體。在初始步驟中,去除較大的囊泡。在接下來的步驟中,外泌體會群集中在過濾膜上。隔離步驟相對較短,但該方法需要用PBS緩沖液對硅結構進行預孵育。除標準過濾技術外,切向流過濾在有效分離外泌體方面也有著嘗試應用,通過切向流過濾技術去除游離肽和其他小化合物從而分離具有確定大小的外泌體。此外,在體外研究和脂肪組織中,也會采用超濾與SEC的結合的方式來分離外泌體。通過(a)對片上過濾器施加壓力或(b)產生電場,迫使外泌體穿過多孔膜,結合錯流和電泳分選來完成篩分。外泌體被發現在各種生物體中,包括哺乳動物、植物和微生物。煙臺快速提取外泌體分離哪家好
外泌體(細胞外囊泡)目前被認為是通過生物活性脂質、蛋白質以及RNA來進行細胞之間的通訊,同樣外泌體也是目前研究較深入的細胞外囊泡,外泌體的直徑只有我們頭發直徑的百萬分之一(30~150nm),當多泡體與細胞膜融合時釋放到細胞外的時候,富含許多生物活性分子,如脂質、蛋白質、轉移RNA以及微小RNA等就會被外泌體被釋放到細胞外,這樣一來就可以被微環境中的靶細胞吸收并且通過通過生物體液運送到遠處。而外泌體與“目標”進行交流方式主要有兩種途徑,一是通過胞吞作用被攝入到細胞內;二是通過膜融合的方式來與靶細胞膜進行融合,接著就會直接釋放其中含有的物質以及信息至靶標細胞,其實外泌體的作用形式是相互的靶細胞分泌含有細胞特異性RNA的外泌體作用于周圍細胞后可誘導其表型重組而獲得組織特異性的表型,而周圍細胞分泌的外泌體則可以通過調控蛋白表達來調控細胞的生理過程。廣州腦脊液外泌體企業外泌體在心血管系統中扮演著重要的調節作用,與各種疾病如心肌梗死、心衰等相關聯。
使用差速離心法分離外泌體主要需要注意的是轉子的選擇。“擺動桶”(SW)轉子和“定角”(FA)轉子,這些轉子的幾何形狀根本不同,因此沉降特性也不同。這些轉子之間的主要區別在于:FA轉子,與旋轉半徑相比,沉積顆粒的較大路徑長度通常較小,允許近似恒定遷移率并簡化描述。然而,第二個區別是圓形FA管的水平橫截面是橢圓形的,不同粒子的路徑長度根據軌跡與橢圓長軸的距離而不同。由于較短的路徑長度,外面顆粒可能沉降得更快,需要根據不同的實驗需要進行選擇。
外泌體分離方法之沉淀分離方法::基于聚合物的沉淀分離方法是利用超親水聚合物來增強小尺寸顆粒(如外泌體)的沉淀。聚乙二醇的常用濃度在8%到15%之間變化。使用這種方法,將含有外泌體的溶液與聚合物一起孵育過夜,并在約10,000×g下進一步離心。外泌體分離方法之FFF分離法:FFF目前是一種很少使用但前景不錯的一種外泌體分離方法。分離由橫流力驅動,并基于顆粒的分子量或流體動力學直徑。它包括高純度、高效率和短時間處理,但迄今為止,FFF在外泌體分離中的使用案例較少,還有待進一步開發。外泌體可作為一種疙瘩標志物進行檢測,通過其生物學特征進行診斷和治著。
外泌體分離方法之免疫學分離方法:免疫學分離法是利用受位于外泌體膜中的選定蛋白質標記物影響的抗體對外泌體進行標記。這些標記的外泌體可以進一步輕松處理和純化,例如,使用微芯片或磁珠。磁分離后,外泌體被純化,磁珠被溶解和去除。通過這種簡單快速的方法,就可以獲得較高純度提取物,但不會分離出缺乏磁性標記抗體識別的表面標記的外泌體,這可能導致外泌體池表現效果不佳。這種方法雖然既省時又直接,輸出純度較高,但也需要較為昂貴的試劑。外泌體的分離純化有助于其后續研究,例如外泌體功能的解析等。長沙血漿外泌體分離費用
外泌體在疙瘩微環境中的參與,反映了其具有的高度的異質性和復雜性。煙臺快速提取外泌體分離哪家好
外泌體分離方法之尺寸排阻層析法:尺寸排阻層析法也被稱為凝膠過濾層析法,這種方法是基于凝膠孔的大小和外泌體的大小,大于凝膠孔徑的顆粒被洗脫;反之,小于凝膠孔徑的顆粒將被抑制。凝膠過濾層析分離法總體上能獲得較高的純度和產量。建議與超濾相結合,這種方法可提供更少的蛋白質污染和更高的外泌體回收率。凝膠過濾層析分離法的缺點是凝膠的成本過高。外泌體分離方法之聲學流體分離:聲學流體分離技術利用聲場根據粒子的大小、密度和可壓縮性來分離粒子。生物樣品在此過程中不會受到損壞,并且分離的本身是非接觸式、高效的和無標記的。煙臺快速提取外泌體分離哪家好