差速離心法分離外泌體的實驗原理：與等密度和梯度離心相反，差速離心從離心管內(nèi)顆粒的均勻初始分布開始。在開始一輪離心過程中，位于管底部附近的一部分目標(biāo)小顆粒不可避免地與較大顆粒共同沉淀。這種共沉淀導(dǎo)致較小顆粒的產(chǎn)量降低。然而，選擇大顆粒，起初位于管半月板附近，在開始一輪離心過程中可能沒有足夠的時間到達管底，從而污染較后一個離心步驟產(chǎn)生的小顆粒顆粒。顯然，交叉污染的程度取決于不同粒子群的相對沉降速度和離心條件。在被分離的粒子的沉降速度之間存在顯著（數(shù)量級）差異的情況下，可以有效地優(yōu)化差速離心協(xié)議以獲得目標(biāo)粒子群的高產(chǎn)量和足夠純度。此外，當(dāng)不同顆粒部分之間的沉降速率只存在微小差異時，優(yōu)化過程不太成功。在這些情況下，取決于離心條件。外泌體分離方法的優(yōu)化需要對比不同方法的純度和收率。泉州尿液外泌體

外泌體是由正常或病理條件下的細胞所分泌，含有各種膜蛋白和胞質(zhì)蛋白。因此，外泌體蛋白也可以作為生物試劑潛在地用于蛋白診斷。外泌體中發(fā)現(xiàn)的十種蛋白質(zhì)主要包括熱休克蛋白8(HSPA8)、CD63抗原(CD63)、β肌動蛋白(ACTB)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、烯醇化酶1α、細胞溶質(zhì)熱休克蛋白90α(HSP90AA1)、CD9、CD81、酪氨酸3-單加氧酶/色氨酸5-單加氧酶打開蛋白、zeta多肽(YWHAZ)、肌肉酸激酶(PKM2)。外泌體蛋白屬于各種功能組，例如四跨膜蛋白（CD9、CD63和CD81）、熱休克蛋白（HSC70和HSC90）、膜轉(zhuǎn)運蛋白（GTPases）和脂質(zhì)結(jié)合蛋白。外泌體標(biāo)記物及其在免疫組織化學(xué)、免疫細胞化學(xué)、流式細胞術(shù)和ELISA等抗體應(yīng)用中的常用的單克隆抗體。泉州尿液外泌體外泌體的分析需要根據(jù)不同來源的細胞選擇適宜的分離方法。

外泌體分離方法之免疫學(xué)分離方法：免疫學(xué)分離法是利用受位于外泌體膜中的選定蛋白質(zhì)標(biāo)記物影響的抗體對外泌體進行標(biāo)記。這些標(biāo)記的外泌體可以進一步輕松處理和純化，例如，使用微芯片或磁珠。磁分離后，外泌體被純化，磁珠被溶解和去除。通過這種簡單快速的方法，就可以獲得較高純度提取物，但不會分離出缺乏磁性標(biāo)記抗體識別的表面標(biāo)記的外泌體，這可能導(dǎo)致外泌體池表現(xiàn)效果不佳。這種方法雖然既省時又直接，輸出純度較高，但也需要較為昂貴的試劑。

外泌體的表征方法之光學(xué)方法：目前，光學(xué)方法是外泌體表征的主要方法，即動態(tài)光散射(DLS)、多角度光散射(MALS)和納米粒子跟蹤分析(NTA)。這些方法允許對尺寸（DLS0.5–200nm；MALS10–500nm；NTA10–1000nm）、尺寸分布和濃度進行高分辨率測量。DLS和MALS的結(jié)合增加了測量范圍(0.5–500nm)和精度。光學(xué)方法比較受歡迎的，但缺點是靈敏度低、試劑消耗高以及需要昂貴的設(shè)備。在使用納米粒子跟蹤分析NTA方法過程中，熒光染料的加入也提高了分辨率，并允許通過使用熒光標(biāo)記來表征表面免疫表型。從而確定標(biāo)記物存在。外泌體的純化可以通過單顆粒色譜等技術(shù)實現(xiàn)。

為了正確使用外泌體作為DDS，我們必須考慮外泌體的成分和它們的形成途徑。然后，還應(yīng)描述外泌體親和力和細胞攝取的特征。外泌體載體表現(xiàn)出不同的目的和功能，這要歸功于外泌體作為基本的轉(zhuǎn)運體本身就具有出色的特性。這可以用于細胞靶向，也可以作為藥物的額外增強。迄今為止，ExoCarta在外泌體中發(fā)現(xiàn)了大約10,000種蛋白質(zhì)、3500種mRNA和超過1100種不同的脂質(zhì)。對于系統(tǒng)審查，出現(xiàn)了許多很棒的數(shù)據(jù)庫，例如Vesiclepedia和ExoCarta，其中描述了外泌體分離程序和來源以及已識別的載體。蛋白質(zhì)分離方法可以用于外泌體的分離和純化。泉州尿液外泌體

外泌體的分離方法可能還存在一定的局限性和偏差。泉州尿液外泌體

外泌體分離方法之基于聚合物的沉淀法：基于聚合物的沉淀技術(shù)通常包括將生物流體與含聚合物的沉淀溶液混合、4℃孵育和低速離心。用于基于聚合物的沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。這種聚合物的沉淀可以對分離的外泌體產(chǎn)生溫和影響而且可以產(chǎn)生中性的pH值。由此，出現(xiàn)了幾種常見的外泌體試劑盒：比如：SystemBiosciences,MountainView,CA,ExoQuick等。研究表明，使用ExoQuick方法可以快速執(zhí)行，無需額外設(shè)備，只需用高速離心機進行超速離心可以獲得高產(chǎn)量的外泌體。但是此方法的缺點是：非外泌體材料對外泌體分離物的污染仍然是基于聚合物的分離方法的一個問題。此外，分離物中的聚合物可能會干擾下游分析。泉州尿液外泌體