體外轉錄技術不斷完善,已相繼建立了單向和雙向體外轉錄系統。該系統主要基于一類新型載體pSP和pGEM,這類載體在多克隆位點兩側分別帶有SP6啟動子和T7啟動子,在SP6RNA聚合酶或T7RNA聚合酶作用下可以進行RNA轉錄,如果在多克隆位點接頭中插入了外源DNA片段,則可以此DNA兩條鏈中的一條為模板轉錄生成RNA。這種體外轉錄反應效率很高,在1h內可合成近10μg的RNA產生,只要在底物中加入適量的放射性或生物素標記的NTP,則所合成的RNA可得到高效標記。該方法能有效地控制探針的長度并可提高標記物的利用率。通過鑒別其特征波長或特征能量就可以確定所分析的元素。崇明區挑選探針推薦貨源
DNA探針根據其來源分為3種:一種來源于基因組中的基因本身,稱為基因組探針(genomic probe),可以是基因的全序列,或者基因上的一段序列;另一種是從相應的基因經轉錄獲得mRNA,再通過逆轉錄得到的探針,稱為cDNA探針(cDNA probe);此外,還可在體外人工合成20~50個堿基的與基因序列互補的DNA片段,稱為寡核苷酸探針。 [1]基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后(如用限制性內切酶做不完全水解)分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫,然后用多種其他菌種的DNA探針來篩選,產生雜交信號的克隆被剔除,***剩下的不與任何其他細菌雜交的克隆則可能含有該細菌特異性DNA片段。閔行區質量探針五星服務除H、He、Li、Be等幾個較輕元素外,還有U元素以后的元素以外都可進行定性和定量分析。
電子探針分析是指以聚焦的高速電子來激發出試樣表面組成元素的特征X射線,對微區成分進行定性或定量分析的一種材料物理試驗,又稱電子探針X射線顯微分析。電子探針分析的原理是:以動能為10~30千電子伏的細聚焦電子束轟擊試樣表面,擊出表面組成元素的原子內層電子,使原子電離,此時外層電子迅速填補空位而釋放能量,從而產生特征X射線。電子探針的功能主要是進行微區成分分析。它是在電子光學和X射線光譜學原理的基礎上發展起來的一種高效率分析儀器。其原理是用細聚焦電子束入射樣品表面,激發出樣品元素的特征x射線,分析特征X射線的波長(或特征能量)即可知道樣品中所含元素的種類(定性分析),分析X射線的強度,則可知道樣品中對應元素含量的多少(定量分析)。
DNA探針(DNA probe)是**常用的核酸探針,為長度在幾十到幾百甚至上千堿基對的單鏈或雙鏈DNA,用特殊示蹤劑(如同位素、酶或有色基團)進行標記;在適當的pH值、溫度和離子強度下,DNA探針利用分子的變性、復性以及堿基互補配對的高度精確性,能與待測樣本中互補的非標記單鏈DNA或RNA以氫鍵結合(雜交),形成雙鏈復合物(雜交體)。雜交體的穩定性取決于兩條單鏈核苷酸之間的互補程度。在嚴格的條件下(高pH值、高溫、低離子強度),不完全匹配的雜交體的兩鏈將會解離,而完全匹配的雜交體將保持雙鏈。將未配對結合的探針洗去后,可用放射自顯影或酶聯反應等檢測系統檢測雜交反應結果。后期生產的儀器,可作X射線背散射照相、照相。
進行分子突變需要大量的探針拷貝,后者一般是通過分子克隆(molecular cloning)獲得的。克隆是指用無性繁殖方法獲得同一個體、細胞或分子的大量復制品。當制備基因組DNA探針前,應先制備基因組文庫,即把基因組DNA打斷,或用限制性酶作不完全水解,得到許多大小不等的隨機片段,將這些片段體外重組到運載體(噬菌體、質粒等)中去,再將后者轉染適當的宿主細胞如大腸肝菌,這時在固體培養基上可以得到許多攜帶有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通過原位雜交,從中可篩出含有目的基因片段的克隆,然后通過細胞擴增,制備出大量的探針。電子探針的構成除了與掃描電鏡結構相似的主機系統以外,還主要包括分光系統、檢測系統等部分。楊浦區優勢探針維修價格
光學顯微鏡目測系統。用以準確選擇需要分析的區域,并作光學觀察。崇明區挑選探針推薦貨源
在原核表達系統中外源基因不僅進行正向轉錄,有時還存在反向轉錄(即生成反義RNA),這種現象往往是外源基因表達不高的重要原因。另外,在真核系統,某些基因也存在反向轉錄,產生反義RNA,參與自身表達的調控。在這些情況下,要準確測定正向和反向轉錄水平就不能用雙鏈DNA探針,而只能用RNA探針或單鏈DNA探針。探針是能與特異靶分子反應并帶有供反應后檢測的合適標記物的分子。利用核苷酸堿基順序互補的原理,用特異的基因探針即識別特異堿基序列的有標記的一段單鏈DNA(或RNA)分子,與被測定的靶序列互補,以檢測被測靶序列的技術叫核酸探針技術。探針制備就是將目的基因進行標記。崇明區挑選探針推薦貨源
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