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全球PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝有使用說明嗎

來源: 發(fā)布時間:2024-01-22

對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到宜轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!?哪里可以買到23966-1?全球PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝有使用說明嗎

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材料:質(zhì)粒DNA指數(shù)生長的真核細胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲存液(100μM):稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,0.2μm濾膜過濾,儲存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS(pH7.4):將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,加入20ml1M的HEPES,調(diào)pH值到7.4,定容至1L,過濾(0.2μm濾膜)后儲存于4℃?zhèn)溆谩7椒ǎ?.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!?陜西非脂質(zhì)體PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝PEI轉(zhuǎn)染試劑使用的時候有什么注意事項?

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注意事項質(zhì)粒質(zhì)量:請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細胞,請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。?如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!?

線性PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子聚合物,分子量25000,它能與核酸形成復(fù)合物,并使該復(fù)合物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣適用于常見細胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。該試劑即使在有血清存在的情況下,它仍然能的將核酸導(dǎo)入細胞。78bio公司提供的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點:優(yōu)越的轉(zhuǎn)染效率,重組蛋白的高表達水平,與含血清的培養(yǎng)基相兼容,低細胞毒性,易于操作?質(zhì)量控制每批次線性PEI轉(zhuǎn)染試劑均經(jīng)過轉(zhuǎn)染測試。將eGFP表達質(zhì)粒(GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01)用EndoFectinTM-Plus轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入亞融合狀態(tài)的HEK-293細胞,轉(zhuǎn)染16h后,超過95%的細胞表達eGFP。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!有人知道PEI轉(zhuǎn)染試劑的價格么?

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1、細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基。2、制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應(yīng)總體積為例。準備兩支1.5mL離心管,一管將質(zhì)粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中,輕輕搖動平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育。注:每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻,保證所取的濃度一致。3、培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預(yù)熱的含有血清的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng),16h左右可以觀測到報告基因的表達。如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!PEI轉(zhuǎn)染試劑和其他轉(zhuǎn)染試劑相比有什么優(yōu)勢?貼壁細胞PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝效果怎么樣

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