對(duì)于某些類(lèi)型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞，可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無(wú)蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無(wú)蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線(xiàn)性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。更多Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑等相關(guān)產(chǎn)品信息，歡迎咨詢(xún)上海曼博生物！如想申請(qǐng)?jiān)囉醚b，可關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio，后臺(tái)回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”參加活動(dòng)哪個(gè)品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑性?xún)r(jià)比高？支鏈PEI轉(zhuǎn)染試劑運(yùn)輸方式

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法：1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線(xiàn)性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶(hù)自行摸索配比，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線(xiàn)性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，替換成無(wú)血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。若想咨詢(xún)更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)信息，歡迎咨詢(xún)上海曼博生物！聚乙烯亞胺PEI轉(zhuǎn)染試劑廠(chǎng)家PEI轉(zhuǎn)染試劑使用的注意事項(xiàng)有哪些？

PEIMAX粉末配置方法：1)將1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃燒杯中；2)放入攪拌轉(zhuǎn)子，放置于磁力攪拌器上，設(shè)置攪拌程序以形成一個(gè)較小的漩渦；3)等待PEIMAX40K完全溶解，通常需要5分鐘左右；4)用25mL塑料移液管加入1N氫氧化鈉滴定至pH6.9~7.1；5)如果不小心超過(guò)7.1，則使用1N的鹽酸和新的塑料移液管將pH重新滴定至6.9~7.1；6)將溶液轉(zhuǎn)移到1L玻璃量筒中，加入水定容至1L；7)用無(wú)菌真空過(guò)濾膜過(guò)濾配制的轉(zhuǎn)染試劑溶液；8)按需分裝，4°C儲(chǔ)存（切記不可冷凍）；注：未經(jīng)配制的粉末有效期為2年。配置成液體后分裝在合適的瓶子中，并且保存在4℃的轉(zhuǎn)染試劑將可在6個(gè)月之內(nèi)保持性能。如jin用于蛋白定性研究，分裝的轉(zhuǎn)染試劑可延長(zhǎng)有效使用期至1年。

Polysciences 轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）的產(chǎn)品，因其較高的轉(zhuǎn)染效果，已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔二個(gè)碳原子，即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”體(proton sponge)。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑，它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞。有實(shí)驗(yàn)證明，分子量為25000的線(xiàn)性PEI即Polysciences 23966（PEI 25K）轉(zhuǎn)染效率表現(xiàn)優(yōu)良。想購(gòu)買(mǎi)24765-1在哪里可以買(mǎi)？

注意事項(xiàng)質(zhì)粒質(zhì)量：請(qǐng)務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級(jí)無(wú)內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）。通過(guò)260nm光吸收測(cè)定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性。細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒(méi)有被細(xì)菌、或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞。更多Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑等相關(guān)產(chǎn)品信息，歡迎咨詢(xún)上海曼博生物！近期還有PEI試用裝申請(qǐng)活動(dòng)，可關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bioPEI轉(zhuǎn)染試劑可以轉(zhuǎn)染哪些細(xì)胞？SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑運(yùn)輸方式

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